Secretory Component遺伝子発現調節機構の解析

分泌成分基因表达调控机制分析

• 批准号: 06771610
• 负责人: 竹之内 信子
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771610/
• 关键词: Secretory component; Subtruction; IFN-γ; Gene expression

Secretory component(SC)は消化管や口腔内における局所免疫機構に重要な役割を果たす、上皮細胞から産生される蛋白質である。しかしながらその発現制御機構は明らかではない。近年、SCがサイトカイン刺激により転写レベルで発現量が増加することが明らかとなった。そこでその詳細なメカニズムを解析するための一端として、ヒト大腸癌由来細胞株HT-29をIFN-γ刺激したときに誘導されるmRNAのcDNAクローニングを試みた。HT-29細胞を100n/ml IFN-γで48時間刺激したもの、未処理のものからそれぞれmRNAを精製し、IFN-γで刺激したものからfirst strand cDNAを合成した。一方、未処理細胞由来のmRNAはphotobiotin化し、first strand cDNAと68度で48時間hybridizeした。Hybridizeした後avisin-biotin complexを形成させ、phenol/chloroform抽出することでhybridizeした核酸を除去した。このようにして得られた一本鎖cDNAはHT-29細胞をIFN-γで刺激した時に特異的に発現したmRNAのcDNA(subtracted cDNA)である。通常は核酸のラベルを^<32>P-dCTPを用い、ハイドロキシアパタイトカラムにより一本鎖cDNAを分離するが、核酸をphotobiotin化しavisin-biotin complexをphenol/chloroform抽出する方法では、ラベルの容易さに加え、一本鎖DNAを容易に分離することができた。更に、HT-29をIFN-γで刺激したときのcDNAから作製したcDNAライブラリーを作製し、subtructed cDNAをラベルし、スクリーニングを進めている。

Secretory component (SC) is important in the immune system of the digestive tract and the oral cavity, and the epithelial cells produce proteins.しかしながらその発existing control mechanism は明らかではない. In recent years, SC がサイトカインstimulates により転writes レベルで発真人が Increase and することが明らかとなった. Details of そこでそのなメカニズムをAnalysis of するための一头として, ヒトColon cancer-derived cell line HT- 29をIFN-γ stimulates and induces mRNA and cDNA test. HT-29 cells を100n/ml IFN-γで48 time stimulation したもの, untreated のものからそれぞれmRNA をrefined し, IFN-γ で stimulation したものから first strand cDNA is synthesized. On the one hand, the untreated cell-derived mRNA is photobiotinized, and the first strand cDNA is hybridized at 68 degrees and 48 hours. Hybridize is the formation of avisin-biotin complex, extraction of phenol/chloroform is the removal of nucleic acid by hybridize. The specific cDNA (subtracted cDNA) of HT-29 cells was stimulated by IFN-γ when it was stimulated. Normally used for nucleic acid testing Isolation of cDNA, photobiotinization of nucleic acid, avisin-biotin The complex phenol/chloroform extraction method is easy, the easy way is easy to add, and the DNA lock is easy to separate. Updated, HT-29をIFN-γでstimulated, subtructed cDNAをラベルし,スクリーニングを入めている.