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ヒトpIg-receptor遺伝子発現調節機構の解析

人猪Ig受体基因表达调控机制分析

基本信息

批准号：
09771520
负责人：
竹之内信子
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771520/
关键词：
polymeric immunoglobulin receptor secretory component NF-κB transcriptional regulation TNF-α NF-kB

项目摘要

平成10年度はpIgR遺伝子発現におけるNF-κBの役割について検討した。1. 方法(1)cycloheximide(CHX)(2.5μg/ml),12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate(TPA)(10ng/ml)を用いてHT-29細胞をそれぞれ1.5時間、48時間TNF-αの共存下で刺激し、nuclear extractを抽出した。ヒトpIgR遺伝子5'上流域のNF-κB結合部位(κB2,転写開始地点側)のDNAをprobeとしてgel shift assayを行った。(2)HT-29細胞を1)と同様に48時間co-stimulation後RNAを抽出し、northern blot法によりpIgR mRNA発現を検討した。一方、NF-κB阻害剤であるpyrrolidinedithiocarbamate(PDTC)を用いて、TNF-αによるpIgR遺伝子発現が阻害されるか検討した。2. 結果CHXとTNF-αのco-stimulationにより、48時間後にはNF-κBのtranslocationは完全に抑制された。TPAとTNF-αのco-stimulation48時間後ではNF-κBのtranslocation量はTNF-α単独よりも増加した。また、CHXまたはTPAとのco-stimulationいづれにおいてもpIgR mRNA発現は完全に抑制された。PDTC処理によりpIgR mRNAの発現は抑制されたが、完全な抑制ではなかった。3. 考察CHXとYNF-αのco-stimulationにより、NF-κBのtranslocationとpIgR遺伝子発現の双方が阻害されていることは、TNF-α刺激によるpIgR遺伝子発現には新規タンパク質合成が必要であり、その一つに、NF-κBの新規合成が関与していることを示している。しかしながら、NF-κB阻害剤によるpIgR遺伝子発現の抑制が不完全であったことは、pIgR遺伝子発現にはNF-κBの活性化だけではなく、他の制御因子も必要であることが示唆される。また、TNF-αとTPAによるNF-κBの活性化はTNF-αとTPAそれぞれの作用によるIκBリン酸化の相加作用の結果であると考えられるが、pIgR遺伝子発現が完全に抑制されていることは、PKCの活性化によって抑制される制御因子の関与が示唆される。

In 2010, the development of pIgR gene was investigated in the service of NF-κB. 1. Methods (1) HT-29 cells were treated with cycloheximide(CHX)(2.5μg/ml) and 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate(TPA)(10ng/ml) for 1.5 and 48 hours respectively. DNA probe and gel shift assay of NF-κB binding site (κB2) in the 5'upper region of pIgR gene (2) pIgR mRNA expression was detected by Northern blot after co-stimulation of HT-29 cells. One side, NF-κB inhibitor, pyridinedithiocarbamate (PDTC), TNF-α and pIgR gene expression were detected. 2. Results CHX and TNF-α co-stimulation were completely inhibited after 48 hours. TNF-α co-stimulation48 hours later, NF-κB translocation increased significantly. The expression of pIgR mRNA was completely suppressed by co-stimulation of CHX and TPA. PDTC treatment inhibited pIgR mRNA expression completely. 3. To investigate the relationship between CHX and co-stimulation of NF-α, NF-κB translocation and pIgR gene production, and TNF-α stimulation, pIgR gene production and new regulation of NF-κB gene synthesis were discussed. The inhibition of pIgR gene expression by NF-κB inhibitors is incomplete, and the inhibition of NF-κB activation by pIgR gene expression is necessary. The activation of NF-κB by TNF-α and TPA is related to the additive effect of IκB protein acidification. pIgR protein production is completely inhibited by TNF-α and TPA.