歯肉線維芽細胞における単球走化性因子JE/MCP-1の遺伝子発現機構

单核细胞趋化剂JE/MCP-1在牙龈成纤维细胞中的基因表达机制

• 批准号: 06771605
• 负责人: 竹下 玲
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Meikai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771605/
• 关键词: 単球走化性因子(MCP-1); 歯周疾患; 遺伝子発現; LPS; 骨芽細胞; 歯肉線維芽細胞; Porphyromonas gingivalis

[目的]成人性歯周炎の歯肉組織に多数の単球/マクロファージの浸潤が認めらること、又これら細胞由来のサイトカインに骨吸収活性があることが示されている。従い、歯槽骨吸収時に歯周組織局所のマクロファージlineageの集積に、単球走化性因子の役割は、重要であると考えられる。そこで、単球特異的走化性因子JE/MCP-1の遺伝子発現について、骨芽細胞を用いて検討したところ、TNF、IL-1、TGFに誘導作用が認められた。これらの知見は、MCP-1/JEの発現が、歯周疾患と関連することを推察させるものであった。実際に、私どもは、歯周病患者の患部組織と歯肉溝浸出液中のMCP-1/JE遺伝子産物の存在について検討し、歯周疾患の病態の進行度と相関性があることを報告している。そこで、私は、本年度文部省科学研究助成金で、歯周病病原性細菌Porphyromonas gingivalisのLPSと線毛を用い、歯肉線維芽細胞における単球走化性因子JE/MCP-1の遺伝子発現機構について検討した。[方法]1)細胞:歯肉線維芽細胞は、歯肉組織よりout growthした細胞を継代培養することにより得た線維芽細胞を用いた。2)total RNAの回収:超遠心法によりtotal RNAを抽出し回収した。3)Northen blot analysis:回収したRNAを電気泳動後ナイロンメンブランに転写し、32PラベルしたJE/MCP-1遺伝子とハイブリダイゼーションを行ないmRNAレベルを検討した。4)単球走化性活性:各サンプル処理細胞の培養上清について、ヒト末梢血単核細胞を用い検討した。[結果]1)P.gingivalis線毛並びにLPSの作用により、歯肉線維芽細胞は、MCP-1/JE遺伝子を発現した。また、処理細胞の培養上清中には、強い単球走化性活性が認められ、この遺伝子産物の存在は、免疫沈降により確認された。2)本菌LPSによる、JE/MCP-1遺伝子発現の誘導作用は、転写因子AP-1の特異的阻害剤であるcurcumin前処理により著明に抑制された。また、この遺伝子発現は、NFκ-Bの特異的阻害剤であるPDTCでも、抑制作用が認められた。3)また、本菌LPSによる、JE/MCP-1遺伝子発現の誘導作用は、tyrosine kinaseの阻害剤であるgenisteinにより抑制作用が認められた。また、A kinaseの特異的阻害剤であるH-89で、弱い阻害作用が認められた。[考察]本研究の結果から、P.gingivalis線毛並びにLPSは、歯肉線維芽細胞のMCP-1/JE遺伝子を著明に誘導し、さらにその発現には、転写因子AP-1とNFκ-Bの関与が示唆された。

[objective] to humanity 歯 periarthritis の 歯 meat organization に most の 単 ball / マ ク ロ フ ァ ー ジ の infiltrating が recognize め ら る こ と and こ れ ら cell origin の サ イ ト カ イ ン に bone absorption 収 active が あ る こ と が shown さ れ て い る. When 従 い, 歯 bone absorption 収 に 歯 week organization bureau の マ ク ロ フ ァ ー ジ lineage の set product に, 単 ball go sexual factor cut は の service, important で あ る と exam え ら れ る. そ こ で, 単 specific go elasticity factor JE/MCP - 1 の heritage 伝 son 発 now に つ い て, bone を bud cells with い て beg し 検 た と こ ろ, TNF, IL - 1, TGF に entrainment が recognize め ら れ た. The <s:1> れら <s:1> view であった, the occurrence of MCP-1/JE が, and the 歯 disease と are related する とを とを とを observation させる れら であった であった. Be interstate に, private ど も は, 歯 weeks patients の organization affected part と 歯 meat in the leaching liquid of の MCP - 1 / JE heritage 伝 zi chan の exist に つ い て の beg し 検, 歯 weeks disease pathological の masato degrees と by sexual が あ る こ と を report し て い る.​ [methods] : 1) cell line d 歯 meat は bud cells, 歯 meat organization よ り out growth し た cells を 継 generation develop す る こ と に よ have り た line d を bud cells with い た. 2)total RNA <s:1> reuptake: Hypertelephoto method によ を total RNAを extraction <s:1> reuptake た. 3) the Northen blot analysis: back 収 し た RNA を electric 気 swimming after ナ イ ロ ン メ ン ブ ラ ン に planning write し, 32 p ラ ベ ル し た JE/MCP - 1 heritage 伝 son と ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン を line な い mRNA レ ベ ル を beg し 検 た. 4) 単 ball go sexual activity: each サ ン プ ル 処 Richard cell の culture supernatant に つ い て, ヒ を 単 nuclear ト peripheral blood cells with い beg し 検 た. [Result]1) The hair of P.gingivalis line and びにLPS <s:1> acted on によ によ, 歯 muscle line germ cells, and MCP-1/JE progeny 伝 を showed た た. ま た の, 処 cells in culture supernatant に は, strong い 単 ball go turn sexual activity が recognize め ら れ, こ の heritage 伝 zi chan の exist は, immune sink に よ り confirm さ れ た. 2) The LPSによる and JE/MCP-1 progeny of this bacterium exhibit a <s:1> inducing effect, the 転 writing factor AP-1 and the specific inhibitor であるcurcumin pretreatment によ indicate に inhibition された. Youdaoplaceholder0, <s:1> cultural heritage 伝 shows 伝, NFκ-B <s:1> specific inhibitor であるPDTCで また, inhibitory effect が recognizes められた. 3)また, the LPS of this bacterium による, the 伝 progeny of JE/MCP-1 exhibit a <s:1> inducing effect められた, the tyrosine kinase <s:1> inhibitor であるgenisteinによ <s:1> inhibitory effect が confirm められた. Youdaoplaceholder0, specific inhibitor of A kinase であるH-89で, weak <s:1> inhibition effect が recognize められた. [investigation] this study results の か ら, P.g ingivalis line around び に LPS は, 歯 meat line d bud cells の MCP - 1 / JE heritage 伝 を zhao Ming に induced し, さ ら に そ の 発 now に は と, planning to write factor, AP - 1 NF kappa - B predominate の masato and が in stopping さ れ た.

项目成果

Hirotaka Kikuchi: "Interlukin-4 acts as a potent stimulator for expression of monocyte chemoattractant JE/MCP-1 in mouse pertoneal macropharges." Biochem.Biophys.Res.Commun.203. 562-569 (1994)

Hirotaka Kikuchi：“Interlukin-4 是小鼠腹膜巨噬细胞中单核细胞趋化剂 JE/MCP-1 表达的有效刺激剂。”

Shigemasa Hanazawa: "Retinoic acid suppression of c-fos gene inhibits expression of tumor necrosis factor-α-induced monocyte chemoattractant JE/MCP-1 in clonal osteoblastic MC3T3-E1 cells." J.Biol.Chem.268. 9526-9532 (1994)

Shigemasa Hanazawa：“视黄酸抑制 c-fos 基因可抑制克隆性成骨细胞 MC3T3-E1 细胞中肿瘤坏死因子-α 诱导的单核细胞趋化剂 JE/MCP-1 的表达。”J.Biol.Chem.268。 1994）