培養骨芽細胞の石灰化とALP活性に対するコラーゲンの架橋形成阻害剤の効果

胶原交联形成抑制剂对培养成骨细胞矿化和碱性磷酸酶活性的影响

• 批准号: 06771651
• 负责人: 関 九美子
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Aichi Gakuin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771651/
• 关键词: 骨芽細胞; アルカリホスファターゼ; 亜鉛; HEBP; カルシウムイオノファー

骨芽細胞のマーカー酵素とみなされているアルカリホスファターゼ(ALP)はPIをアンカーとしたectoenzymeとして存在しており、硬組織石灰化に極めて重要な役割を果たしている。骨組織の石灰化とALP活性との関連について検討するため、培養骨芽細胞を用いて、物理化学的にミネラル沈着を抑制するHEBPおよび亜鉛処理による石灰化抑制時のALP活性を解析した。HEBP(0.1mM)および亜鉛(0.1mM)処理はいずれもMC3T3-E1の石灰化を抑制すると同時にALPの培養液中への遊離を促進した。EctoenzymeとしてのALP量も有意に増加していたが、ALPのectoenzymeとしての存在比率(90%以上)はこれら薬物により変動しなかった。また、RT-PCR法によりALPのmRNAの増加も確認された。また、これら薬物は石灰化を抑制しない低濃度でもALP活性を増加させたので、ALP合成系に対する促進効果であると考えられた。また骨コラーゲン、非コラーゲン蛋白の産生抑制を惹起するカルシウムイオノファーA23187処理により細胞内カルシウムを増加させたところ、MC3T3-E1、ROSI7/2.8、SaOS等の骨芽細胞様細胞において、いずれもALPの培養液中への遊離の増加が認められた。このA23187の効果は培養液中の血清濃度に依存せず、処理時間に依存していた。また、A23187による遊離ALPの増加はML-7処理によって抑制されたが、TPA、スタウロスポリンにより影響を受けなかった。このことからA23187によるALP遊離量の増加は細胞内カルシウム上昇に基づき、カルモジュリンを介した機構に関連している可能性が高い。石灰化/コラーゲン形成とALP動態との関連についてさらに検討を加えている。

Bone bud cell enzymes and enzymes are very important for bone bud cell calcification. The relationship between calcification and ALP activity in bone tissue was studied, and the ALP activity was analyzed during calcification inhibition by HEBP and lead treatment in cultured bone bud cells. HEBP(0.1 mM) and Pb (0.1 mM) treatments inhibited the calcification of MC3T3-E1 and promoted the dissociation of ALP in the culture medium. The amount of ECTOENZYME and ALP is intentionally increased, and the presence ratio of ALP and ECTOENZYME is more than 90%. ALP mRNA amplification was confirmed by RT-PCR. In addition, the ALP synthesis system can promote the growth of ALP activity. The inhibition of the production of osteogenic and non-osteogenic proteins was induced by the treatment of A23187, which increased the intracellular production of osteogenic cells such as MC3T3-E1, ROSI7/2.8 and SaOS, and increased the free production of ALP in the culture medium. The effect of A23187 was dependent on serum concentration and treatment time. The increase of free ALP in A23187 was affected by ML-7 treatment. The increase of ALP free amount in A23187 is highly likely to be related to the increase of intracellular concentration, basal concentration and cellular concentration. Calcification/Calcification Formation and ALP Dynamics

项目成果

A.Togari: "The release of alkaline phosphatase from osteoblastic cells stimulated by calcium jonophore A23187" The Japanese Journal of Pharmacology. 67(suppl). 241 (1995)

A.Togari：“钙 jonophore A23187 刺激的成骨细胞释放碱性磷酸酶”《日本药理学杂志》。