ヒト線維芽細胞由来がん細胞遊走促進因子の同定とそれに対する抗体作製

人成纤维细胞来源的癌细胞迁移促进因子的鉴定和针对它们的抗体的产生

• 批准号: 06771660
• 负责人: 林堂 安貴
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771660/
• 关键词: がん浸潤; 細胞遊走促進因子; 上皮-間葉相互作用; 線維芽細胞

これまでin vitro浸潤モデルを用いて口腔癌の浸潤増殖機構に与える線維芽細胞の影響について解析を行い、線維芽細胞の産生する液性因子が口腔癌の細胞遊走を強く促進することを見いだした。本研究では線維芽細胞培養上清より癌細胞の遊走を促進する因子の分離しその作用機序の解析を行った。線維芽細胞の培養上清を限外濾過にて濃縮後、FPLCシステムを用いてSuperdex 200pgカラムに展開・溶出させた。その結果、50〜70kDaの画分に口腔癌細胞遊走促進活性が認められた。さらに同画分をヘパリン親和性カラム、Mono Qカラム等を用いて精製を進めたところ、熱及び還元に比較的安定な約50kDaの蛋白が分離された。同蛋白の遊走活性は抗β1インテグリン抗体やGRGDS及びYIGSRによって影響を受けないことから細胞外基質蛋白とは区別され、精製過程や生化学的性質より既知の成長因子とは異なる新しい蛋白であることが示唆された。同蛋白は口腔癌細胞のストレスファイバーの形成を抑制し、細胞膜のラッフリング引き起こすことがわかった。さらに本蛋白の遊走活性はチロシンキナーゼ阻害物質のゲニステインで強く抑制されることより、その作用発現にチロシンキナーゼによる細胞蛋白のリン酸化の関与が推測された。また、本蛋白は百日咳毒素によってその活性が阻害された。以上の結果より、線維芽細胞の産生するがん細胞遊走促進因子はGi蛋白共役受容体を介してチロシンキナーゼを活性化し細胞骨格系を制御して細胞の運動能を亢進させていると考えられた。

This is the first time that human oral cancer cells have been used in vitro invasion and proliferation. It is also the first time that human oral cancer cells have been used in vitro invasion and proliferation. In this study, we analyzed the isolation and mechanism of factors that promote the migration of cancer cells in cultured supernatant of vascular germ cells. The supernatant of cell culture was concentrated by limited filtration, and FPLC system was developed by Superdex 200pg solution. Results: 50 ~ 70kDa protein was found to promote the migration of oral cancer cells. The protein of about 50kDa was isolated by purification, heat and other methods. The activity of the same protein is affected by the differentiation, purification, and biochemical properties of extracellular matrix proteins, including anti-β1-protein antibodies, GRGDS, and YIGSR. The same protein inhibits the growth of oral cancer cells, and inhibits the growth of cell membranes. In addition, the migration activity of this protein is related to the acidification of cellular proteins, which is supposed to be related to the development of cellular proteins. This protein inhibits pertussis toxin activity. The above results show that the cell migration promoter Gi protein co-receptor mediates the activation of the cell skeleton and controls the cell motility.

项目成果

林堂 安貴: "口腔扁平上皮癌の浸潤増殖における上皮成長因子(EGF)と線維芽細胞の関与." 大阪大学歯学雑誌. 36. 483-500 (1991)

Yasuki Lindo：“表皮生长因子 (EGF) 和成纤维细胞参与口腔鳞状细胞癌的侵袭性生长。” 大阪大学牙科杂志 36. 483-500 (1991)

Hayashido Y: "Effect of epidermal growth factor on invasion of human squamous cell carcinoma cells into collagen gel." The Cancer J.4. 257-261 (1991)

Hayashido Y：“表皮生长因子对人鳞状细胞癌细胞侵入胶原凝胶的影响。”

Shirasuna K: "Extracellular matrix production and degradation by adenoid cystic carcinoma cells:participation of plasminogen activator and its inhibitor in matrix degradation." Cancer Res.53. 147-152 (1993)

Shirasuna K：“腺样囊性癌细胞的细胞外基质产生和降解：纤溶酶原激活剂及其抑制剂参与基质降解。”

Shirasuna K: "Immunohistochemical localization of epidermal growth factor(EGF)and EGF receptor in human oral mucosa and its malignancy." Virchows Archiv A Pathol Anat.418. 349-353 (1991)

Shirasuna K：“人类口腔粘膜中表皮生长因子（EGF）和 EGF 受体的免疫组织化学定位及其恶性肿瘤。”