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ポルフィロモナスジンジバリスのトランスフェリン結合性蛋白の精製とその性質

牙龈卟啉单胞菌转铁蛋白结合蛋白的纯化及性质

基本信息

批准号：
06771994
负责人：
田崎功子
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771994/
关键词：
ポルフィロモナスジンジバリストランスフェリン結合鉄増殖

项目摘要

我々は、以前、Porphyromonas gingivalisが歯肉溝浸出液中に認められる濃度のトランスフェリンをその鉄源として利用し、増殖できることを見い出し、さらに、P.gingivalisにはトランスフェリンと結合する受容体が菌体表面に存在する可能性を示した。本研究では、P.gingivalis菌体表面に存在しているトランスフェリンの受容体を同定し、その諸性質を調べることによりP.gingivalisのもつトランスフェリン結合性タンパク質の本態を解明することを目的とした。P.gingivalis381とトランスフェリンとの結合性を放射能ラベルしたトランスフェリンを用いて調べると同時に、結合性の定量法を確立した。そして、その結合をScatchard解析したところ、P.gingivalis381のトランスフェリンに対するKd値は1.37μMであり、細胞当りの結合部位数は1.13×10^5であった。また、鉄制限培地に連続的に接種し培養したところ、P.gingivalis381のトランスフェリンに対する結合能は上昇し、鉄添加培地のP.gingivalis381と比較して、鉄制限培地に5回接種した株は約4倍結合能が増加していた。この培養条件下でのP.gingivalisから外膜標品を調節し、SDS-PAGEとウェスタンブロットを行い分析したところ、約20Kdのところにトランスフェリンと結合するバンドが認められた。以上の結果から、P.gingivalisのトランスフェリン結合性蛋白は、鉄制限下での培養により発現し、分子量は約20Kdの外膜蛋白であることが示唆された。

We have previously shown the possibility of the presence of iron in the extract of Porphyromonas gingivalis on the surface of a receptor bound to the extract of Porphyromonas gingivalis. This study aims to clarify the identity and properties of P. gingivalis receptors on the surface of P. gingivalis cells. P. genivalis 381: The radioactivity of the binding agent was determined by simultaneous and quantitative methods. Scatchard analysis of P. genivalis381 and the Kd value of P. genivalis381 were 1.37μM and 1.13×10^5 respectively. The binding energy of P. genivalis381 in iron limited culture increased by about 4 times compared with P. genivalis381 in iron limited culture Under these culture conditions, P. gingivalis was isolated from the outer membrane standard and analyzed by SDS-PAGE. The binding of P. gingivalis to P. gingivalis was about 20Kd. As a result, the binding protein of P. gingivalis was found in culture under iron and iron limits, and the outer membrane protein with molecular weight of about 20Kd was found in culture.