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ホスファチジン酸ホスファターゼの活性調節機構の検討

磷脂酸磷酸酶活性调控机制的研究

基本信息

批准号：
06772139
负责人：
今井伸一
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ホスファチジン酸(PA)ホスファターゼはde novoリン脂質合成系において、PAを脱リン酸化しジアシルグリセロール(DG)を産生する酵素である。我々はこのPAホスファターゼの精製を試み、ブタ胸腺膜画分より動物細胞では初めて分子量83,000の酵素の精製(Kanoh et al.JBC,267,‘92)、及びそのcDNAクローニングにも成功した。しかし、このcDNAを発現ベクターに組み込んでCOS7細胞に発現させたところ、タンパク質が発現しているにも関わらず、PAホスファターゼの活性は認められなかった。タンパク質の発現についてはcDNAより予想されるアミノ酸配列を用いて作成した抗ペプチド抗体によるウェスタンブロッティングで検出した。さらに昆虫細胞や酵母を用いて発現実験を行ったところ、いずれの場合もタンパク質が発現しているにも関わらず酵素活性は認められなかった。また、精製ブタ83KPAホスファターゼのアミノ酸配列を解析しなおしたが、やはりこのcDNAと一致していた。以上のことから、この分子量83,000のタンパク質はPAホスファターゼではないと考えられ、PAホスファターゼの精製を再度行った。現在まで、PAホスファターゼであると考えられる分子量36,000のタンパク質を約40,000倍まで精製したところであり、今後このタンパク質のアミノ酸配列の決定及びcDNAクローニングを行う予定である。

The synthesis of fatty acid (PA), deacidification (PA), deacidification (DG) and enzyme synthesis (DG) were studied. I said PA, cDNA, Kanoh et al.JBC,267,'92, cDNA, and so on. This is the first time that the COS7 cell has been shown to show that there is a significant difference between the two groups. The COS7 cell has been shown to show that there is a difference between the two groups. I don't know. I don't want to know. The insect cell yeast was used to detect the enzyme activity in the insect cell. This is the same as that in the analysis of 83KPA, precision, and cDNA. The molecular weight, PA, molecular weight, molecular weight, molecular weight Now that the molecular weight is 36000, the molecular weight is 36000, the molecular weight is about 40000 times, and the future is due to the determination of acid and the determination of the molecular weight of 36000.