小胞体蛋白質のカルボキシル末端シグナル依存性と推定される選別輸送機構の解析

内质网蛋白羧基端信号依赖性选择性转运机制分析

基本信息

  • 批准号:
    06780575
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.58万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
  • 财政年份:
    1994
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1994 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

ラットheme oxygenase-1のcDNAをSV40をプロモーターとする発現ベクターであるpSVLに組み込みnaiveな酵素(完全長289アミノ酸)を、COS-1細胞で一過性発現させた。細胞分画後のイムノブロットや免疫蛍光抗体染色により発現されたheme oxygenaseの細胞内局在を確認したところ、生理的な存在オルガネラである小胞体に局在した。この発現系を用いて小胞体局在化シグナルの解析を行った。カルボキシル末端の疎水性領域を欠失させたdeletion mutant(263アミノ酸)は小胞体へ輸送されず、細胞質に留まった。ゆえに、カルボキシル末端の疎水性領域が小胞体膜へanchoringすることに必要であると考えられる。大腸菌のchloramphenicol acetyltransferase(CAT)やdihydrofolate reductase(DHFR)のカルボキシル末端側にheme oxygenaseのカルボキシル末端の疎水性領域(26アミノ酸)をつないだキメラタンパクはそれぞれCATやDHFRの抗体で細胞内局在を判定すると小胞体へ輸送された。ゆえに、カルボキシル末端の疎水性領域があればそのタンパクは小胞体膜へ選別輸送(target)されるといえた。現在、ヒトheme oxygenase-2の抗体を作成できたので、同様に局在を調べている。また、カルボキシル末端の疎水性アミノ酸20数残基のペプチドを化学合成し、これをリガンドとしたアフィニティーカラムを用いてラット肝の細胞質などから相互作用する物質の単離、精製を行っている。
The heme oxygenase-1 enzyme naive enzyme (full length of 289mol ·L-1) was detected in the pSVL, and the COS-1 enzyme was detected in the COS-1 cell. After cell division, immuno-light antibody staining showed that the heme oxygenase was present in the cytosol, the physiological presence and the presence of corpuscles. The small cell bureau is in the process of analyzing the data. At the end of the experiment, there is a deficiency in the field of water. There is a lack of deletion mutant (263% acid). The small cell body is very important. At the end of the experiment, the water-borne field of small cell membrane, anchoring membrane, is necessary. Chloramphenicol acetyltransferase (CAT), dihydrofolate reductase (DHFR), heme oxygenase (DHFR), heme oxygenase (acid), hydrophilic field (26% acid), hydrophilic field (26% acid), antibody to CAT (acid). The intracellular situation is in the determination of the cell body. At the end of the day, we need to target the membrane of the small cells in the field of water. At present, the antibody against heme oxygenase-2 has been made into an anti-virus, and the same bureau is in the same place. At the end of the terminal, there were 20 hydrophilic acids, 20 residues, chemical synthesis, chemical synthesis, liver, liver, cell, interaction, and so on.

项目成果

期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
S.Takahashi: "Heme-heme oxygenase complex:Structure of the catalytic site and its implication for oxygen activation." J.Biol.Chem.269. 1010-1014 (1994)
S.Takahashi:“血红素-血红素加氧酶复合物:催化位点的结构及其对氧活化的影响。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
S.Takahashi: "Heme-heme oxygenase complex:Structure and properties of the catalytic site from resonance raman scattering." Biochemistry. 33. 5531-5538 (1994)
S.Takahashi:“血红素-血红素加氧酶复合物:共振拉曼散射催化位点的结构和特性。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
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  • DOI:
    10.11307/mededjapan.50.3_245
  • 发表时间:
    2019
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
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  • 通讯作者:
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  • 发表时间:
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  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
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  • 通讯作者:
    石川 和信
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  • 发表时间:
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  • 作者:
    菅原 亜紀子;本谷 亮;小林 元;諸井 陽子;熊谷 智広;八木沼 洋行;福島 哲仁;石川 和信
  • 通讯作者:
    石川 和信
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  • DOI:
  • 发表时间:
    2019
  • 期刊:
  • 影响因子:
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  • 作者:
    仲 俊行;小林 元;Kazi Selim Anwar;本村あゆみ;Khandakar Haque;Alif Ul Hasan;矢島 大介;石川 和信
  • 通讯作者:
    石川 和信

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    2022
  • 资助金额:
    $ 0.58万
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    Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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