脳虚血による神経細胞傷害の分子メカニズムの解析

脑缺血引起神经元损伤的分子机制分析

• 批准号: 06780660
• 负责人: 萩原 民雄
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780660/
• 关键词: 脳虚血; 神経細胞死; 血清タンパク質

一過性虚血再潅流後に変化するタンパク質の解析ラットを用いて30分の一過性虚血後、再潅流し経時的に大脳皮質を採取して細胞分画を行い、核、ミトコンドリア、ミクロソームおよびサイトゾールを調製した。非虚血側および偽手術群を対照として各画分に含まれるタンパク質をSDS-PAGEにより分析したところ、サイトゾール画分において分子量67kDaのタンパク質が顕著に増加しており、その増加パターンは再灌流開始後、16時間および8日にピークを示す二峰性であった。イオン交換カラムTSK DEAE-5PWおよびゲルろ過カラムTSK G3000SWXLを用いた高速液体クロマトグラフィーによりこのタンパク質をSDS-PAGE上単一バンドを示すまでに精製した。精製標品をTPCK-Trypsinで限定分解後、逆相カラムShodex C18-5Bを用いた高速液体クロマトグラフィーによりペプチドマッピングを行い、得られたいくつかのフラグメントについてアミノ酸配列を決定したところ、このタンパク質は血清アルブミンであることが明らかになった。また、ラット全血清を抗原としてウサギ抗血清を作成し、イムノブロット法により分析したところ、アルブミンを含めて8種類の血清由来タンパク質がサイトゾール画分においてアルブミンと同様の増加パターンを示した。さらにヒトトランスフェリンに対する抗血清を作成して同様の分析を行った結果、その中の80kDaのタンパク質はトランスフェリンであることが明らかになった。また、作用機序の異なるいくつかの血管透過性抑制剤を用いて同様の分析を行ったが顕著な変化は見られなかった。現在、一過性虚血による血清タンパク室の漏出機構に関して解析を進めている。

After transient ischemia and reperfusion, the cortex was taken from the cortex after 30 minutes of transient ischemia and reperfusion, and the cells were divided into three groups: the nucleus, the nucleus, and the nucleus. Non-empty blood side and pseudo-operation group were analyzed by SDS-PAGE, and the molecular weight of 67kDa was increased after reperfusion, 16 days and 8 days. TSK DEAE-5PW and TSK G3000SWXL are used for high-speed liquid chromatography and purification on SDS-PAGE. Refined standard TPCK-Trypsin after limited decomposition, reverse-phase conversion Shodex C18- 5B can be used in high-speed liquid, high-speed liquid. The antiserum was prepared and analyzed by the method of "complete serum antigen" and "complete serum antigen". The origin of the 8 kinds of serum was analyzed by the method of "complete serum antigen" and "complete serum antigen". The antiserum was prepared and analyzed in the same way. The 80kDa antiserum was prepared and analyzed in the same way. The mechanism of action is different, and the vascular permeability inhibitor is used in the same analysis. Now, transient blood loss, serum leakage, mechanism analysis, and so on.