プロスタグランジン受容体キメラ分子を用いた同受容体構造の機能的領域の解析

利用前列腺素受体嵌合分子分析前列腺素受体结构的功能区

• 批准号: 08670108
• 负责人: 平田 雅一
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670108/
• 关键词: プロスタノイド; プロスタサイクリン; 受容体; アゴニスト; 変異導入タンパク; プロスタグランジンE; プロスタグランジンD; プロスタグランジンI

プロスタノイド受容体はロドプシン型受容体ファミリーに属する7回膜貫通型受容体である。その中でプロスタノイド受容体に特徴的な構造がすべてのプロスタノイド受容体に存在している。したがって、リガンドのこれらの受容体への結合においては、この共通構造がプロスタノイドの基本骨格を認識し、非共通部分が各プロスタノイドに対する結合特異性を決定すると考えられる。プロスタノイド受容体ファミリー中の異なる2種の受容体を組み合わせたキメラ受容体を作成し、リガンド結合親和性を比較することにより、リガンドの特異的結合を決定するリガンド構造を認識する受容体領域の同定を行った。[方法]マウスプロスタノイド受容体の中では比較的相同性が高く(アミノ酸配列で約40%の相同性)、セカンドメッセンジャーとして共にアデニル酸シクラーゼを活性化するプロスタグランジン(PG)D_2受容体(mDP)とPGI_2受容体(mIP)を用い、N末端側がmDPの対応する部位で置き換えられたmIP、および、N末端側がmIPで置き換えられたmDP、という構造のキメラ受容体cDNAを10種類作成した。これらをCOS細胞に発現させ、IPアゴニストのiloprost、carbacycline、及びPGD_2、PGE_1、PGE_2、PGF_2αのキメラ受容体への結合親和性を検討した。[結果および考察]作成したキメラ受容体は、mIPまたはmDPと異なるリガンド結合の特徴を示した。プロスタノイド分子の五員環構造と側鎖の二重結合の有無がキメラ受容体によるリガンド認識に大きく影響していた。これらの解析から、プロスタノイド受容体の第6、7膜貫通領域がプロスタノイド側鎖の二重結合の有無によるリガンド構造の識別に寄与が大きく、第3膜貫通領域はPGリガンドの五員環構造の違いを認識することが明らかとなった。

The first type of container is a 7-loop through type container. The characteristic structure of the receiver in the middle of the system is the existence of the receiver in the middle of the system. The binding specificity of the receptor is determined by the common structure of the receptor and the non-common part of the receptor. Two different kinds of receptors in the receptor system are assembled, the receptor is prepared, the binding affinity is compared, the specific binding is determined, the structure is recognized, and the identity of the receptor domain is determined. [Method] The similarity between the two receptors is high.(About 40% identity of acid ligand), PG D_2 receptor (mDP), PGI_2 receptor (mIP), N-terminal side of mDP receptor, N-terminal side of mIP receptor, PG D_2 receptor (PG D_2 receptor), PG D_2 receptor (PG D_2 receptor (PG D_2 receptor), PG D_2 receptor (PG D_2 receptor), There are 10 kinds of receptor cDNA in the structure. This was discovered in COS cells, and the binding affinities of iloprost, carbacycline, and the gamma receptors PGD_2, PGE_1, PGE_2, and PGF_2α for IP were investigated. [Results] The characteristics of the receptor, mIP and mDP are shown. The structure of the five-membered ring of the molecule and the existence of the double combination of the side lock are greatly influenced by the content of the molecule. The sixth and seventh membrane penetration areas of the receptor are analyzed, and the presence or absence of double combination of the side lock and the five-member ring structure of the third membrane penetration area are recognized.

项目成果

Ushikubi Fumitaka,et al.: "Handbook of Experimental Pharmacology volume 126" Springer-Verlag Berlin Heidelberg, (1997)

Ushikubi Fumitaka 等：“实验药理学手册第 126 卷”Springer-Verlag Berlin Heidelberg，(1997)

Masakazu Hirata,et al.: "Generation and Analysis of Mice with Disrupted Prostaglandin D Receptor Gene" The Japanese Journal of Pharmacology. 71. 248-248 (1996)

Masakazu Hirata 等人：“前列腺素 D 受体基因被破坏的小鼠的生成和分析”日本药理学杂志。