均一化cDNAライブラリーを用いた植物生長点分化に関与する遺伝子の単離と解析

使用均质 cDNA 文库分离和分析参与植物生长点分化的基因

• 批准号: 06760082
• 负责人: 河内 孝之
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06760082/
• 关键词: アラビドプシス; 生長点分化; 均一化cDNAライブラリー; ディファレンシャル法; 生殖成長期; 花序分裂組織

植物の発生および形態形成のプログラムは、生長点の分化により決定される。本研究では、遺伝子発現分布の解析技法により茎頂分裂組織の分化に関与する遺伝子を単離することを目的とした。これまでに組織特異性に基づいて単離された遺伝子は、いずれも多量に存在し、分化の方向を決定する遺伝子というより、その結果により発現の誘導されたものであった。そこで均一化cDNAライブラリーを構築し遺伝子の単離に利用することにした。栄養生長期のアラビドプシス地上部組織由来のcDNA(Vegetative Straight:VS)を合成し、均一化操作を加え、各均一化cDNA(Vegetative Equalized:VE)ライブラリーを作成した。コロニーハイブリダイゼーションおよびランダムな塩基配列の決定によりライブラリーの均一化度を評価、ほぼ均一化している事を確認した。同様に、実体顕微鏡下で採取した第5ステージまでの花序・花分裂組織(約2000個)由来のcDNA(Inflorescence Straight:IS)を合成し、均一化操作を加え、各均一化cDNA(Inflorescence Equalized:IE)ライブラリーを作成した。約10000クローンを規則正しく保存しVS、VE、ISのDNAをプローブにしたディファレンシャルハイブリダイゼーションを行い、各々、栄養生長期に大量に発現するもの、微量ではあるが栄養生長期にも発現しているもの、花序で大量に発現しているものを同定し、これらを除いた。すなわち、花序分裂組織特異的に比較的少量発現する遺伝子を選抜した結果、約400クローンが得られた。一部については、塩基配列の決定ならびにノザン法により特異的発現の確認を行った。ノザン法のレベルで花序・花分裂組織特異的に発現する遺伝子について、今後、発現する細胞の特定、形質転換体での機能解析が必要である。

Plant growth and morphogenesis are determined by the differentiation of growth points. The aim of this study is to analyze the relationship between the differentiation of shoot apex and the distribution of gene. This tissue specific gene expression is determined by the presence of multiple genes and the direction of differentiation. This is the first time that a cDNA library has been constructed and utilized. cDNA(Vegetative Straight:VS) derived from aerial tissues in the growth stage was synthesized and homogenized, and cDNA(Vegetative Equalized:VE) was prepared. The determination of the uniformity of the matrix and the uniformity of the matrix are confirmed. In the same way, the cDNA(Inflorescence Straight:IS) derived from the 5th stage of inflorescence and flower division tissue (about 2000) was synthesized and homogenized under microscope, and each homogenized cDNA(Inflorescence Equalized:IE) was prepared. About 10000 pieces of DNA are regularly preserved, and the DNA of VS, VE, and IS is regularly preserved. The DNA of VS, VE, and IS is regularly preserved. A small number of seeds were selected from the inflorescence division tissue, and about 400 seeds were obtained. A part of the determination of the base arrangement and the identification of the occurrence of a specific event. It is necessary to analyze the function of the specific, morphological and morphological changes of the inflorescence and flower division tissue.