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誘導型プロモーターによる植物の誘導変異遺伝子タギング法の開発

使用诱导型启动子开发植物诱导突变基因标记方法

基本信息

批准号：
08876018
负责人：
河内孝之
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、アンチセンスによる遺伝子発現の抑制系を応用し、変異誘導の調節可能な変異体作出のモデル実験系を構築し評価することである。つまり植物の染色体中にランダムに誘導型プロモーターを挿入し、転写を誘導することにより表現形を得る。ランダムな挿入法としてアグロバクテリアTiプラスミドを利用した常法を、誘導型プロモーターとしてはテトラサイクリンリプレッサータンパク質結合部位をもつCaMV35Sプロモーターを採用した。実験系の評価のため次の事柄について検討した。(i)培養細胞用いT-DNA挿入変異を飽和させ、目的の突然変異体が分離できること。これは塩素酸耐性の細胞をテトラサイクリンによるプロモーター誘導条件下で選抜することで試みたが突然変異体の取得には至らなかった。主として、低い形質転換効率が原因である。(ii)導入プロモーターからの転写物が誘導されること。これは形質転換タバコにテトラサイクリンを与え、誘導プロモーターからの転写誘導をRNaseプロテクション法を用い確認した。プレート法では切断した葉を用いた真空浸透法による誘導に比べて誘導は非常に弱かった。これは蒸散量が少ないこと、テトラサイクリンの不安定性に原因であると考えた。支持体を用いた水耕栽培法で植物を生育し、誘導プロモーターからの転写を誘導したところ、良好な誘導が見られた。(iii)破壊された遺伝子座の誘導によるRNAの変動の確認。これは形質転換植物においてはゲノムにランダムに組み込まれていると考えられる挿入DNAの隣接部位をIPCR法によりT回収した。現在のところ、非形質転換体植物での転写が得られる断片の取得には至らず、現在進行中である。以上の結果を総合的に考察すると、挿入プロモーターの発現の制御は可能であるが、実験系として確立するためには、より多くの形質転換体を得て解析を進める必要がある。

In this study, the purpose of this study is to show that the inhibition system is used, and that the system may be used in this study. In the chromosome of the plant, the shape of the chromosome is displayed in the shape of the table. In this way, the normal method was used, and the CaMV35S was used in the joint part of the joint. In this way, the normal method was used to use the normal method, the normal method and the Ti method. I'm sorry. I'm sorry. (I) the culture cell uses the T-DNA to enter the cell, and the purpose is to suddenly separate the cell from the cell. In the case of acid tolerance, please do not know what to do. Under the guidance condition, you can choose the correct solution to obtain the acid tolerance suddenly. The main reason for this is that the rate of infection is low. (ii) enter your home page. Please write something that will lead you to write something. Please tell me that you need to know that you are in a situation where you need to know that you are not in need of information, and that you need to use the "confirmation" method to write RNase messages. The vacuum immersion method is much weaker than the vacuum immersion method in cutting off the spool. The evapotranspiration is low, and the cause of uneasiness is determined. Support the use of water ploughing cultivation method to help plants grow, guide plants to grow, and guide plants to grow and grow, and good ones to guide plants. (iii) break the RNA activity confirmation. The shape of the plant is different from that of the plant. This is the test of the DNA connection. The IPCR method is used to determine the contact area of the plant. At present, the fragments have been obtained by the use of non-shaped plants, and they are now in progress. As a result of the above results, the results show that it is possible to control the system, make sure that the system is in good condition, and that the analysis of the system is necessary.