高等植物のミトコンドリア輸送に働くタンパク質構造の解析

高等植物线粒体运输涉及的蛋白质结构分析

基本信息

批准号：
06760087
负责人：
中川強
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Shimane University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度の研究ではサツマイモのチトクロムオキシダーゼサブユニットVcおよびF_1ATPaseのεサブユニットについてGUSレポーターとの融合タンパク質をタバコで発現させ、ミトコンドリアへの輸送効率の検討を行った。サブユニットVcそしてεサブユニットは両者とも移行後のプロセシングを受けないタンパク質である。サブユニットVcについては、E47コンストラクトが高い移行能力を持つことが示されているが、それより13アミノ酸短く、α-ヘリクス領域と疎水性領域を全て含むW34コンストラクトでは移行能力が低いことが明らかとなった。このことはW34からE47までの荷電アミノ酸の領域が移行に必要であることを示している。εサブユニットは後半にに荷電アミノ酸が頻発する構造を持っている。この部分を3'側より順次欠失していったところ、この領域の1/3を保持しているL41コンストラクトまでは移行効率が高く、全く持たないN26コンストラクトでは低いという結果が得られた。このことよりεサブユニットのN26からL41の領域に移行効率を高める構造が存在することが示された。εサブユニットとサブユニットVcでの結果は類似しており、両者とも後半の荷電性領域の一部を移行に必要とすることが示された。両サブユニットが共通の機構でミトコンドリアへ輸送されているのかもしれない。今後これらの領域にに注目し、アミノ酸配列が重要なのか、あるいはアミノ酸の数が重要なのかということについてさらに詳細な解析を進めるつもりである。

在今年的研究中，在烟草中表达了带有GUS报告蛋白的融合蛋白，用于细胞色素氧化酶亚基VC和红薯细胞球色素氧化酶亚基的F_1ATPaseε亚基，并研究了运输到线粒体的运输效率。亚基VC和ε亚基都是不受转移后处理的蛋白质。对于亚基VC，E47构建体已被证明具有较高的迁移能力，但已证明它在W34构建体中的迁移较少，W34构建体短短13个氨基酸，包含所有α-螺旋和疏水区域。这表明迁移需要带电从W34到E47的带电氨基酸的区域。 ε亚基的结构在下半年经常发生带电的氨基酸。当该部分在3'侧删除时，过渡效率高至L41构建体，该构建体占该区域的三分之一，而N26构建体没有结果。这表明存在一种结构可以提高N26区域的过渡效率到ε亚基的L41。 ε亚基和亚基VC的结果相似，这表明两者都需要一部分后期充电的区域进行迁移。两个亚基都可以通过共同的机制运输到线粒体。我们将来将重点关注这些区域，并将进一步详细分析氨基酸序列是否重要或氨基酸的数量是否重要。