食品蛋白質の精製に最適なモノクローナル抗体の精製法の開発

开发最适合食品蛋白纯化的单克隆抗体纯化方法

基本信息

批准号：
06760118
负责人：
榎本淳
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

【目的】抗原抗体反応の厳格な反応特異性を応用した免疫アフィニティークロマトグラフィーは、食品のような種々の成分が混在している系より必ずしも高濃度ではない生理活性物質をone stepで精製するための最適な方法であるといえるが、この方法に適した抗体は目的物質の変性や失活を防ぐため、マイルドな外部環境変化により目的物質の解難が可能なものであると考えられる。本研究ではそのような抗体を得るための最適な免疫方法に関して、特に実験動物の選択と抗原の免疫回数の面から検討した。【方法】モデル抗原として主要な牛乳蛋白質であるβ-ラクトグロブリン、αs1-カゼイン、さらには鶏卵蛋白質であるオボムコイドを選択し、これらをマウス(BALB/c、C3H/He、C57BL/6)、ウサギ、ヤギ、ニワトリに二週間おきに数回免疫した。各免疫一週間後に得られた抗血清の特異抗原に対する抗原抗体反応のpHおよびイオン強度依存性を酵素免疫測定法(ELISA)により測定・比較した。【結果】各抗血清のpHおよびイオン強度依存性は動物種間やマウスの系統間では大差が認められなかったものの、初回免疫後得られたマウス抗血清はpHやイオン強度変化に対して敏感であり、免疫応答の初期に産生される抗体こそ免疫アフィニティークロマトグラフィーに適した抗体であることが示された。さらにこれらの一次応答抗体のレパートリーの中から、極めてイオン強度依存性の高いモノクローナル抗体を作製することに成功した。従来、特異抗体を作製する際、大量に抗体を得ることを目的として、免疫を繰り返し、抗体価を如何に上げるかが主眼とされてきたが、本研究の結果は抗体の使用目的に合わせて免疫方法を検討することが重要であることを示すものである。

[客观]使用抗原 - 抗体反应的严格反应特异性的免疫亲和力色谱法被认为是净化生理活性物质的最佳方法，在浓度上不一定比包含各种成分（例如食物）的系统更高。但是，据信，适合这种方法的抗体可以防止目标物质变性或失活，从而允许外部环境中的轻微变化以允许靶物质发出。在这项研究中，特别是在选择实验动物方面检查了获得此类抗体的最佳免疫方法和进行抗原免疫的次数。方法：主要牛奶蛋白β-乳球蛋白，αS1-蛋白，甚至是卵球蛋白，一种鸡蛋蛋白，作为模型抗原和小鼠（BALB/C，C3H/HE，C57BL/6），每两周免疫几次。测量每次免疫后一周获得的抗原抗体反应对特异性抗原的pH和离子强度依赖性，并通过酶免疫测定（ELISA）进行比较。 [结果]尽管动物物种或小鼠菌株之间每种抗血清的pH和离子强度依赖性没有显着差异，但初始免疫后获得的小鼠抗血清对pH和离子强度的变化敏感，并且表明在免疫反应早期产生的抗体适用于免疫原性色谱。此外，从这些主要反应抗体的曲目中，我们成功地产生了具有极高的离子强度依赖性的单克隆抗体。通常，在制备特定抗体时，主要重点是重复免疫和增加抗体滴度以获得大量抗体，但这项研究的结果表明，根据使用抗体的使用，考虑免疫方法很重要。