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プロスタグランジンエンドペルオキシド合成酵素-2の遺伝子発現調節機構の解明

前列腺素内过氧化物合酶2基因表达调控机制的阐明

基本信息

批准号：
06770097
负责人：
横山知永子
金额：
$ 0.58万
依托单位：
National Cardiovascular Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

プロスタグランジン生合成経路の律速酵素であるプロスタグランジンエンドペルオキシド合成酵素(PES)のうち,炎症の初期段階におけるプロスタグランジン産生の上昇に関与している可能性が示唆されるPES-2のヒト遺伝子の構造の解析を行った。ヒトPES-2遺伝子の5′上流には、NF-κB,NF-IL6,およびcyclic AMP response element(CRE)にコンセンサスな塩基配列が存在していたので、この領域をレポーター遺伝子(ルシフェラーゼ)の上流に挿入したトランスフェクションベクターを作製した。一方、U937細胞におけるPES-2のmRNAレベルは、未分化状態の細胞では非常に低いが、ホルボールエステル(TPA)でマクロファージ様に分化させるとPES-2の発現が上昇することが明らかになった。そこで、TPAで分化させたU937細胞をもちいてトランスフェクション実験を行った。その結果、挿入した領域にSV40プロモーターの約10倍という強力なプロモーター活性の存在することが明らかとなった。さらに、NF-κB,NF-IL6およびCREの各領域を変異させたものについて検討したところ、CREを変異した場合、野生型の示すプロモーター活性の約20%まで低下した。またU937細胞をTPA処理した後、PES-2遺伝子のCREに特異的に結合する転写調節因子が経時的に増加することが、ゲルシフトアッセイによって確認された。これらのことから、U937細胞の分化の過程におけるPES-2遺伝子の発現に、CREが重要な役割を担っていることが明らかになった。

The evolution of the enzyme (PES) in the pathway of transcription and synthesis, the relationship between the rise of transcription and synthesis in the early stages of inflammation, and the possibility of the structural analysis of PES-2 transcription proteins were studied. 5′ upstream of PES-2 gene, NF-κB,NF-IL6, and cyclic AMP response element(CRE), which is a kind of cyclic AMP response element(CRE), exists in the upstream of PES-2 gene. The expression of PES-2 mRNA in U937 cells was significantly lower than that in undifferentiated cells (TPA). U937 cells were divided into two groups: TPA and TPA. As a result, the SV40 is about 10 times stronger than the SV 40. In addition, NF-κB, NF-IL6 and CRE showed a decrease of about 20% in activity in different fields. After treatment with TPA in U937 cells, CRE specific binding of PES-2 gene was confirmed. The development of PES-2 gene and CRE in U937 cell differentiation process are important for cell differentiation.