ヒトサイトメガロウイルスDNA複製に必要なウイルス遺伝子の同定

人类巨细胞病毒 DNA 复制所需的病毒基因的鉴定

• 批准号: 06770220
• 负责人: 渡辺 慎哉
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770220/
• 关键词: ヒトサイトメガロウイルス; DNA複製

ヒトサイトメガロウイルス(HCMV)のDNA複製開始点領域を含むプラスミドの複製に必要なHCMVゲノム領域を13個のDNA断片として同定した。このゲノム領域は、その長さを合計するとHCMV全ゲノムの約3/4に相当した。次に、この領域中のHCMV DNA複製に関与する遺伝子を明らかにすることを試みた。そのために、以下の方法をとった。単純ヘルペスウイルス(HSV)ですでに同定されているHSV DNA複製関連遺伝子とホモロジーをもつHCMV遺伝子を選びだし、発現ベクターにクローン化した。また、HSVと類似性を持たないHCMV遺伝子の存在に対応するため、前述の13個のプラスミドDNAをより細分化したクローンを作製した。さらに、本研究申請時計画したDNA複製アッセイ系を、エレクトロポレーションを用いる系に改良した。本研究の進行中、我々と同様の実験を行い11個のHCMV遺伝子を同定したという報告が出た。これらの遺伝子は、前述の13個のDNA断片中に含まれていた。これらの遺伝子の産物には、いくつかの転写活性化因子と考えられるものが含まれており、発現ベクターを用いる本研究では、さらにこれらの転写活性化因子を除外することができると考えた。そこで、報告された11個の遺伝子を発現ベクターに組み込んだプラスミドを用いてHCMV DNA複製のアッセイを行った。その結果、HCMV DNA複製開始点を含むプラスミドのHCMV感染細胞内複製を検出できなかった。この原因を検討していたところ、11個の遺伝子の中で、プライマーゼ複合体因子をコードすると考えられる遺伝子(UL102)の塩基配列に誤りがあり、実際のUL102はさらに上流からコードされているという報告がごく最近出た。したがって、我々の作製したUL102遺伝子のクローンは本来の2/3しかなかったため機能を発現できなかったと考えられる。現在、正しい塩基配列に基づいたクローンを作製中で、でき次第、転写活性化因子を除外できるかどうか検討する予定である。

DNA replication start point area of HCMV The 13 DNA fragments necessary for replication of HCMV in the field are determined together. The total area of ​​このゲノムは and その长さを total するとHCMV full ゲノムの is equivalent to 3/4. The HCMV DNA replication in the sub-field and the sub-field are the same as those in the field.そのために、The following method is をとった.単pure HSV (HSV) HSV DNA replication is related to the HCMV legacy of HCMV and the development of HCMV.また、HSV とsimilarity をhold たないHCMV 缝子のexistent に対応するため、 The above-mentioned 13 pieces of DNA are subdivided and produced. When applying for this study, it was planned to use DNA replication アッセイを and エレクトロポレーションを to improve いる system. This study is in progress, and we are currently conducting a final report on 11 HCMV survivors.これらの缝子は, among the aforementioned 13 DNA fragments, まれていた is included.これらの缝子のproductには、いくつかの転写activation factorと考えられるものが有まれており、発成ベクターを Use いるでは and さらにこれらの転 to write the activation factor をexcept することができるとtest えた.そこで、Report された11の伝子を発行ベクターに集团み込んだプラスミドを用いてHCMV DNA replication method. As a result, the start point of HCMV DNA replication was determined by the replication of HCMV in infected cells.このreasonを検多していたところ、11の伝子の中で、プライマーゼ Complex Factor をコードすると卡えられる缝子(U L102) の塩婩组にErrorりがあり、実记のUL102 はさらに上流からコードされているという report がごく was recently released.したがって、我々の做出したUL102弝子のクローンは originallyの2/3しかなかったため Function を発appears できなかったと卡えられる. At present, the production of the correct base arrangement and the order of the production of the activating factor and the activating factor are excluded.