トリカブト毒成分(アコニチン)HPLC/MSによる高感度分析

采用 HPLC/MS 高灵敏度分析附子毒成分（乌头碱）

• 批准号: 06770317
• 负责人: 石井 晃
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Hamamatsu University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770317/
• 关键词: アコニチン; 高速液体クロマトグラフィー; マススペクトロメトリー; 固相抽出

本研究の最初の段階として、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)におけるアコニチンの最適な分離条件を決定するために、通常のHPLCを用いて種々の移動相について検討した。このときのアコニチンと内部標準のメチルリカコニチンの検出は、234nmの紫外部の吸収によって行った。20mM酢酸アンモニウム(pH=7.0):アセトニトリル=50:50(v/v)の移動相はアコニチンと内部標準を良く分離し、アコニチンは6.5分に、内部標準は5.4分に検出された。次に、液体中からのアコニチンと内部標準の精製の条件について決定した。最も良く使われるカラムであるイオン交換樹脂のBondElut Certifyと疎水性のSep-Pak C_<18>とを比較した。BondElut Certifyを用いて1mlの尿からそれぞれ50μgのアコニチンと内部標準を精製したところ、回収率はアコニチンが97.4±7.3%(mean±SD、n=3)、内部標準が101±4.3%であり、紫外部の吸収においては妨害ピークも殆ど認められなかった。Sep-Pak C_<18>カラムを用い、クロロフォルム:メタノール(8:2)で溶出した場合の回収率は、アコニチンで67.9±21%、内部標準で74.5±12%であり、BondElut Certifyが、体液からのアコニチンの精製に有効であることが示唆された。これらの結果を踏まえて、アコニチンと内部標準の標準品をHPLC/FAB-MSに注入し、マススペクトルを測定し、positive FABとNegative FABを測定したが、Positive FABの方が感度は良好であった。アコニチン、内部標準共に分子ピークを検出することができ、アコニチンは、m/z646、629、613、588、105、内部標準は、m/z682、617、586、216、188、146、115、92のフラグメントが得られた。現在、これらのフラグメンテーションの解析と感度限界の検討を行なっており、これらの実験が完了した後に、結果を雑誌に投稿する予定である。最近HPLC/MSの新しいイオン化法として、大気圧化学イオン化法(APCI)が開発され、従来のHPLC/MSの10倍以上の感度が得られると報告されている。アコニチンは比較的イオン化が困難であり、高感度を得るためには、APCIの方が望ましいと思われる。今後APCI法を用いたアコニチンの検出同定も行ないたいと考えている。

In the initial stage of this study, the optimal separation conditions for high speed liquid chromatography (HPLC) were determined, and the mobile phase was used in general HPLC. The wavelength of light emitted from the ultraviolet spectrum is 234nm. 20mM acetic acid (pH=7.0): mobile phase =50:50(v/v) Good separation from internal standard, 6.5 min from internal standard, 5.4 min from internal standard Second, in the liquid, the temperature is determined by the internal standard and the refining conditions. BondElut Certify and Sep-Pak C_are the most effective exchange resins<18>. BondElut Certify uses 1ml of urine to prepare 50μg of aconitine and refine it according to internal standards. The recovery rate of aconitine is 97.4±7.3%(mean±SD, n=3), and the internal standard is 101±4.3%. The absorption of the ultraviolet part is too strong to hinder the recognition of the skin. Sep-Pak C_<18>C The results of this test are as follows: HPLC/FAB-MS, positive FAB, Negative FAB, positive FAB, Positive FAB. The internal standard total number of molecules, m/z 646, 629, 613, 588, 105, internal standard number, m/z 682, 617, 586, 216, 188, 146, 115, 92, and so on. Now, the analysis and sensitivity limit of the problem are discussed. The problem is solved and the result is determined. Recently, new HPLC/MS chemical method, high pressure chemical method (APCI) has been developed, and the sensitivity of HPLC/MS more than 10 times has been reported. APCI is the most difficult way to compare APCI. In the future, APCI will be used to determine the same behavior.