DNAトポイソメラーゼ I阻害抗癌剤に対する耐性機構の研究

DNA拓扑异构酶I抑制剂抗癌药物耐药机制研究

• 批准号: 06770422
• 负责人: 藤原 康弘
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770422/
• 关键词: 肺癌; DNAトポイソメラーゼ I; 薬剤耐性; PCR-SSCP法; 高速液体クロマトグラフィー

1)トポイソメラーゼ|遺伝子点突然変異の検討:従来申請者らがPCR-SSCP法による培養細胞DNAトポイソメラーゼ|cDNAにおける点突然変異存在の有無の検討に用いてきたプライマーのみではRNA抽出のステップが必要で煩雑なため、まずgenomic DNAを用いてエクソン(1〜21)各々の点突然変異を検出できるような新たなプライマーの設計とその検討を行なった。ついで新規作成プライマー決定後、検体(気管支鏡採取あるいは剖検時採取)解析に移り、報告書作成時点で21症例(54検体、腫瘍部と正常肺組織あるいは末梢血白血球のペア)のトポイソメラーゼ|遺伝子エクソン12、15、20(培養細胞での点突然変異存在が報告されている部位)のPCR-SSCPを終了した。胸膜中皮腫の1例でエクソン12解析で腫瘍部、正常組織部共に異常バンドを検出し(Polymorphism)、塩基配列決定によりプライマーの設計上カバーせざるを得なかったイントロン11の1塩基置換(A-T)を確認したが、その他の20症例にDNAトポイソメラーゼ|遺伝子異常は認められなかった。今後も検体採取を継続し、対象症例50例にて最終解析を行なう予定である。2)塩酸イリノテカンの臨床薬理学的検討:従来の測定法では塩酸イリノテカン(CPT-11)とその活性代謝産物SN38を別々に測定しなければならず多検体の処理には限界があり、将来の臨床検査レベルへの導入に障害となると考えられたため、まずHPLCを用いたCPT-11/SN38同時測定系の確立を行なった。ついで測定系の妥当性確認後、本格的血中濃度測定に移り、報告書作成時点までに11症例(63コース)の薬物濃度測定を終了している。CPT-11のCmax(ng/ml)およびAUC(ng h/ml)は50、60、80(mg/m2)投与で各々520±87/2738±276、645±97/2922±558、944±158/4180±582であった。SN38のCmax(ng/ml)およびAUC(ng h/ml)は50、60、80(mg/m2)投与で各々10.9±2.6/81.0±12.4、12.5±4.4/103.2±45.7、16.2±4.0/139.7±41.1であった。薬動力学的検討ならびにLimited Sampling Modelの樹立は症例数が15〜20例以上になるまで実施不可能なため、症例集積を継続中である。

1) ト ポ イ ソ メ ラ ー ゼ | heritage 伝 contact suddenly - different の beg: 検 従 to applicants ら が PCR - SSCP method に よ る culture cell DNA ト ポ イ ソ メ ラ ー ゼ | cDNA に お け る point all of a sudden variations exist different の any の に 検 please use い て き た プ ラ イ マ ー の み で は RNA extraction の ス テ ッ プ が necessary で vexed 雑 な た め, ま ず geno Mic を DNA with い て エ ク ソ ン (1 ~ 21) each 々 の point suddenly - different を 検 out で き る よ う な new た な プ ラ イ マ ー の design と そ の 検 line for を な っ た. つ い で new rules make プ ラ イ マ ー decided after, 検 body (気 tube lens to take あ る い は as profile control 検) analytical に move り, report done point で 21 cases (54 検 body, swollen sores と normal lung tissue あ る い は peripheral blood leukocyte の ペ ア) の ト ポ イ ソ メ ラ ー ゼ | heritage 伝 son エ ク ソ ン 12, 15, 20 (culture cell で の suddenly - different deposit In the が report されて る る section) <s:1> PCR-SSCPを end た た. 1 swollen in pleural の で エ ク ソ ン 12 parsing で swollen sores of abnormal and normal organization department に バ ン ド を 検 out し (Polymorphism), salt base with column decided に よ り プ ラ イ マ ー の design カ バ ー せ ざ る を must な か っ た イ ン ト ロ ン 11 の 1 salt base replacement (A - T) を confirm し た が, そ の he の 20 cases に DNA Youdaoplaceholder0 トポ ソメラ トポ ゼ ゼ ゼ ゼ the 伝 sub-exception ソメラ recognizes められな った った. In the future, the 検 検 body will be determined by を継続 を継続, 50 corresponding cases にて, and the final analysis of を rows なう to determine である. 2) salt acid イ リ ノ テ カ ン の beg: clinical 薬 neo-confucianism 検 従 to の measurement で は acid salt イ リ ノ テ カ ン (CPT - 11) と そ の active metabolites SN38 を don't 々 に determination し な け れ ば な ら ず much 検 の 処 Richard に は limit が あ り, future clinical 検 の レ ベ ル へ の import に handicap of と な る と exam え ら れ た た め, ま ず HPLC Youdaoplaceholder0 using を た CTP-11 /SN38 to simultaneously determine the system を to establish を rows なった. つ い で determination is の justice confirmed, determination of the concentration in the blood of the lattice に move り, report done point ま で に 11 cases (63 コ ー ス) の 薬 concentration determination を end し て い る. CPT-11 <s:1> Cmax(ng/ml)およびAUC(ng h/ml) および 50, 60, 80(mg/m2) were administered to で 々520±87/2738±276, 645±97/2922±558, 944±158/4180±582であった, respectively. SN38 の Cmax (ng/ml) お よ び AUC h (ng/ml) は 50, 60, 80 (mg/m2) with で 々 10.9 + / - 2.6/81.0-12.4, 12.5 + 41.1 + / - 45.7, 16.2 + / - 4.0/139.7-4.4/103.2 で あ っ た. The 検 discussion of pharmacokinetics ならびにLimited Sampling Model is to establish a <s:1> number of cases が15 to 20 or more になるまで. It is impossible to implement なため and the accumulation of cases を継続 である.

项目成果

Ohashi,N.,Fujiwara,Y.et al: "Topoisomerase I gene alternation in tumor samples from lung cancer patients" Proc.American Association for Cancer Research. 36. 640 (1995)

Ohashi,N.,Fujiwara,Y.et al：“肺癌患者肿瘤样本中的拓扑异构酶 I 基因改变”Proc.美国癌症研究协会。