ヒト表皮角化細胞の分化誘導時におけるTGF-βの内因性の活性化に関する研究

人表皮角质形成细胞分化诱导过程中TGF-β内源性激活的研究

• 批准号: 06770641
• 负责人: 松井 喜彦
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770641/
• 关键词: TGF-b; 表皮角化細胞

Transforming growth factor b(TGF-b)は表皮角化細胞自身が産生するオートクリン生長因子の一つであり、表皮角化細胞の細胞増殖の制御に重要な役割を果たしている。TGF-bは不活性型で産生され活性化されて作用を発揮する。表皮細胞の分化時の増殖抑制にも分泌されたTGF-bの内因性の活性化が最も重要な段階であることが予想されている。そこで本研究では表皮角化細胞の分化誘導時のTGF-bの内因性の活性化が存在するかどうか、存在すればその機序を検討することを目的とした。研究の概要(1)ヒト表皮角化細胞の培養はMCDB-153を用いた無血清培養法にて行った。(2)ヒト表皮角化細胞の分化誘導は培養液のCaイオンを低濃度(0.1mM)から高濃度(1.8mM)に変更することにより行った。分化誘導により細胞増殖が抑制された。(3)TGF-bの定量は当初CCL(ミンク肺細胞樹立株)を用いた生物学的アッセイにより行っていた。しかしこの方法では誤差が大きく分化誘導時と非分化誘導時の比較は困難であった。MLEC(ミンク肺上皮細胞樹立株)にPAI-1プロモーター/ルシフェラーゼ遺伝子をレポーター遺伝子としてトランスフェクトさせたPL-MLEC株を用いた生物学的アッセイ法はより誤差が少ない。TGF-bの定量法を本方法に変更した。分化誘導時にはTGF-bの活性が増加した。(4)TGF-bの中和抗体により分化誘導時の増殖抑制が部分的に阻害された。(5)nPAおよびplasminの中和抗体およびplasminに対する阻害剤により分化誘導時の増殖抑制が部分的に阻害された。(6)nPAおよびTGF-bのc-DNAを調整した。今後nPAおよびTGF-bの分化誘導時と非分化誘導時のm-RNA発現量をノーザンブロット法により比較する予定である。

Transforming growth factor (TGF - b) b は が epidermal keratinocytes itself produces す る オ ー ト ク リ の ン growth factor a つ で あ り, epidermal keratinocytes の cells raised colonization の suppression に important な "を cut fruit た し て い る. The <s:1> inactive type of TGF- β で produces され activation されて effects を exert する. Epidermal cells differentiation の の raised colonization inhibit に も secretion さ れ た TGF - b の endogenous の activeness が も most important な Duan Jie で あ る こ と が to think さ れ て い る. そ こ で this study で は epidermal keratinocytes の differentiation induced の TGF - b の endogenous の activeness が exist す る か ど う か, existing す れ ば そ の machine sequence を beg す 検 る こ と を purpose と し た. Summary of Research <s:1> (1)ヒト epidermal keratinocyte <s:1> culture を MCDB-153を serum-free culture にて った. (2) ヒ ト epidermal keratinocytes の induction の は cultures of Ca イ オ ン を low concentration (0.1 mM) か ら high concentration (1.8 mM) に - more す る こ と に よ り line っ た. Differentiation induces によ によ cell proliferation が inhibition された. (3) The <s:1> quantification of TGF- β b the initial CCL(<s:1> embryclinal lung cell establishment line)を was performed using the アッセ によ によ た た of た biology って って た た. The <s:1> と <s:1> <s:1> the <s:1> method で the が error is が large く く when induced by differentiation と when induced by non-differentiation <s:1> is relatively <s:1> difficult であった. MLEC (ミ ン ク lung epithelial cells establish strains) に PAI - 1 プ ロ モ ー タ ー / ル シ フ ェ ラ ー ゼ posthumous son 伝 を レ ポ ー タ ー posthumous son 伝 と し て ト ラ ン ス フ ェ ク ト さ せ た PL - MLEC を strains with い た biology ア ッ セ イ method は よ り error less が な い. TGF-b <s:1> quantitative method を this method に changes to た た. During differentiation induction, に が TGF- β -b <s:1> activity が increases by <s:1> た. (4) The に inhibition of the が part of the <s:1> proliferation inhibition during the differentiation induction of TGF- β -b <s:1> neutralizing antibody によ が. (5) the nPA お よ び plasmin の neutralizing antibody お よ び plasmin に す seaborne る resistance against tonic に よ り differentiation induced の raised inhibit が part of に resistance against さ れ た. (6)nPAおよびTGF- β b <s:1> c-DNAを modulates た た. In the future the nPA お よ び TGF - b の differentiation induced と non-dividing induced の m - amount of RNA 発 now を ノ ー ザ ン ブ ロ ッ ト method に よ り compare す る designated で あ る.