IDENTIFICATION OF DEVELOPMENTAL CONTROL GENES USING YAC TRANSGENIC MICE

使用 YAC 转基因小鼠鉴定发育控制基因

基本信息

  • 批准号:
    07044282
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 3.2万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for international Scientific Research
  • 财政年份:
    1995
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1995 至 1996
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

In this project, we try to establish an experimental approach coupling positional cloning and transgenic technologies for identification and isolation of mutated genes. Recent advances in genome analysis technologies enable us to isolate large size mammalian genomic DNA into YAC (Yeast artificial chromosome) or BAC (bacterial artificial chromosome) vectors. In combination with efficient genetic mapping techniques, it is feasible to map any mutation on mouse chromosome, and narrow down the region containing mutated gene to submega base range. However, identifying the relevant mutated gene can still be a formidable task, and a conventional method of identifying a gene by searching DNA sequence differences between mutant and wild-type may not always be possible. In those cases, alternative approach utilizing transgenic technologies would have potential to define the location of a gene on a large genomic DNA,i.e.introducing YAC or BACs containing genomic fragments harboring candidate genes … More into mutant mice and scoring for the rescue of the phenotype. We are now trying to identify mutated genes for developmental mutations such as t^<w5>, quaking both in the T/t complex of mouse Chromosome 17, and tk (tail kinks) on Chromosome 9. In each case, we have narrowed down the region where mutated gene resides to several hundred kb to 1 Mb. In order to find the mutated genes for these mutations, we first established the methodologies for production of transgenic mice carrying YAC or BAC DNA.YAC or BAC DNAs were prepared as follows ; an agarose plug containing YAC or BAC DNA was run on a pulsed field gel, and a band corresponding YAC/BAC clone waw excised and treated with agarase. After the enzyme digestion, released DNAs were washed and concentrated by a filtration apparatus. DNA solution of 5ng/mul was microinjected into mouse fertilized eggs. When a YAC clone with 650kb insert derived from the t^<w5> region was injected, we could establish three lines of transgenics carrying -270kb, -380kb and -450kb, respectively. Also, we have produced two transgenic mice, and found that both of mice contained intact, 150kb BAC clone derived from tail kinks region. Using these transgenic mice, we have begun breeding experiments to ask if these transgenes can rescue mutant phenotypes or not. Less
本研究试图建立一种结合定位克隆和转基因技术的突变基因鉴定和分离的实验方法。基因组分析技术的最新进展使我们能够将大尺寸的哺乳动物基因组DNA分离到YAC(酵母人工染色体)或BAC(细菌人工染色体)载体中。结合高效的遗传作图技术,可以对小鼠染色体上的任何突变进行定位,并将突变基因的区域缩小到亚百万碱基范围。然而,鉴定相关的突变基因仍然是一项艰巨的任务,并且通过搜索突变体和野生型之间的DNA序列差异来鉴定基因的常规方法可能并不总是可行的。在这些情况下,利用转基因技术的替代方法将有可能确定基因在大基因组DNA上的位置,即引入含有携带候选基因的基因组片段的YAC或BAC ...更多信息 突变小鼠并对表型的挽救进行评分。我们现在正试图鉴定发育突变的突变基因,如<w5>小鼠17号染色体T/t复合体中的tk(尾部扭结)和小鼠9号染色体上的tk(尾部扭结)。在每种情况下,我们都将突变基因所在的区域缩小到几百kb到1 Mb。为了寻找这些突变的突变基因,我们首先建立了制备YAC或BAC DNA转基因小鼠的方法,制备YAC或BAC DNA,将含有YAC或BAC DNA的琼脂糖塞在脉冲场凝胶上电泳,切下相应的YAC/BAC克隆带,用琼脂糖酶处理。在酶消化后,通过过滤装置洗涤和浓缩释放的DNA。将5 ng/穆尔的DNA溶液显微注射到小鼠受精卵中。将含有650 kb插入片段的YAC克隆<w5>注入到转基因植株中,获得了三个分别携带-270kb、-380kb和-450kb的转基因株系。同时,我们还制备了两个转基因小鼠,发现两个小鼠都含有完整的,150 kb的BAC克隆来自尾扭结区。使用这些转基因小鼠,我们已经开始进行育种实验,以询问这些转基因是否可以挽救突变表型。少

项目成果

期刊论文数量(21)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Kimura,S.et al.: "A 900 bp genomic region from the mouse dystrophin promoter directs lacZ reporter expression only to the right heart of transgenic mice." Dev.Growth Diff.(in press). (1997)
Kimura,S.et al.:“来自小鼠肌营养不良蛋白启动子的 900 bp 基因组区域将 lacZ 报告基因的表达仅引导至转基因小鼠的右心。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Niwa,H.: "Cell-cycle-dependent expression of the STK-1 gene encoding a novel murine putative protein kinase" Gene. 169. 197-201 (1996)
Niwa,H.:“编码新型小鼠推定蛋白激酶的 STK-1 基因的细胞周期依赖性表达”基因。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Abe, K.: "Purification primordial germ cells from TNAP^<beta-geo> mouse embryos by FACS-gal." Develop.Biol.180. 468-472 (1996)
Abe, K.:“通过 FACS-gal 从 TNAP^<beta-geo> 小鼠胚胎中纯化原始生殖细胞。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Hiramatsu,R.et al.: "The 3' enhancer region determines the B/T specificity and pro-B/pro-B specificity of immunoglobulin Vκ-Jκ joining." Cell. 83. 1113-1123 (1995)
Hiramatsu, R. 等人:“3 增强子区域决定了免疫球蛋白 Vκ-Jκ 连接的 B/T 特异性和 pro-B/pro-B 特异性。”Cell。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Nagata, T.: "Physical mapping of the retinoid X receptor beta in mouse and man." Immunogenetics. 41. 83-90 (1995)
Nagata, T.:“小鼠和人类视黄醇 X 受体 β 的物理图谱。”
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YAMAMURA Ken-ichi其他文献

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Genetic studies on unique phenotypes in MSM/Ms mouse strain
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    21220010
  • 财政年份:
    2009
  • 资助金额:
    $ 3.2万
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    Grant-in-Aid for Scientific Research (S)
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  • 批准号:
    09044325
  • 财政年份:
    1997
  • 资助金额:
    $ 3.2万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for international Scientific Research
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  • 批准号:
    04044136
  • 财政年份:
    1992
  • 资助金额:
    $ 3.2万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for international Scientific Research
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  • 批准号:
    01044117
  • 财政年份:
    1989
  • 资助金额:
    $ 3.2万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for international Scientific Research
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  • 批准号:
    63440082
  • 财政年份:
    1988
  • 资助金额:
    $ 3.2万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (A)
Production of a transgenic mouse model of familial amyloidotic polyneuropathy.
家族性淀粉样变性多发性神经病转基因小鼠模型的制作。
  • 批准号:
    61480439
  • 财政年份:
    1986
  • 资助金额:
    $ 3.2万
  • 项目类别:
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相似国自然基金

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    11275212
  • 批准年份:
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    106.0 万元
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    39180005
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相似海外基金

YAC-TgMを用いた受精後メチル化インプリンティング成立・維持機構の解明
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  • 批准号:
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  • 财政年份:
    2006
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    Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
CONTIG MAPS OF HUMAN CHROMOSOME 17Q22Q23: YAC
人类染色体 17Q22Q23 的重叠群图谱:YAC
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  • 批准号:
    0208335
  • 财政年份:
    2002
  • 资助金额:
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    Standard Grant
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    6388784
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  • 资助金额:
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  • 批准号:
    6501957
  • 财政年份:
    2001
  • 资助金额:
    $ 3.2万
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人类染色体 17Q22Q23 的重叠群图谱:YAC
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    2000
  • 资助金额:
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ES 细胞中 B 珠蛋白 YAC 转基因的缺失分析
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  • 财政年份:
    2000
  • 资助金额:
    $ 3.2万
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INTRODUCTION OF YEAST ARTIFICIAL CHROMOSOMES (YAC) INTO THE MOUSE GERMLINE
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  • 批准号:
    6109018
  • 财政年份:
    1998
  • 资助金额:
    $ 3.2万
  • 项目类别:
CONTIG MAPS OF HUMAN CHROMOSOME 17Q22Q23: YAC
人类染色体 17Q22Q23 的重叠群图谱:YAC
  • 批准号:
    6252655
  • 财政年份:
    1997
  • 资助金额:
    $ 3.2万
  • 项目类别:
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作者:{{ showInfoDetail.author }}

知道了