ステロイドホルモン及びTGF-βによる骨シアロタンパク質の転写の調節

类固醇激素和 TGF-β 对骨唾液蛋白转录的调节

• 批准号: 07771795
• 负责人: 小方 頼昌
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771795/
• 关键词: 骨シアロタンパク質; ステロイドホルモン; TGF-β; グルココルチコイド; 遺伝子プロモーター; 転写調節; 石灰化; 分子生物学

1,骨芽細胞培養系にステロイドホルモン(グルココルチコイドまたはビタミンD_3)を添加後,RNAを抽出し,ノーザンブロットを行った結果,グルココルチコイド(デキサメサゾン)は骨シアロタンパク質(BSP)の転写を促進し,逆にビタミンD_3は抑制することが判明した.2,グルココルチコイドの効果がmRNAの安定性に関与するかどうかを,RNA合成阻害剤を用いて検討したところ,グルココルチコイドは安定性には影響しないことが明らかになった.3,BSPのcDNAを用いて,BSP遺伝子上流域(プロモーター)のクローニングを行い,約3000bpの塩基配列の決定を行ったところ,TATAボックスおよびCATボックスの塩基配列が逆方向であること,ビタミンD_3レセプター結合部位(VDRE)がTATAボックスと重複していること,転写開始の約1000bp上流にグルココルチコイドレセプター結合部位(GRE)が存在することが判明した.4,BSPプロモーター中のGREをアイソトープで標識し,ゲルシフトアッセイにてグルココルチコイドレセプターとの結合性の検索を行った結果,両者が結合し,その結合がコンセンサスGRE配列と競合することが明らかになった.5,ルシフェラーゼベクターに,種々の長さに調節したプロモーター遺伝子を挿入し,骨芽細胞様細胞(ROSI7/2.8cells)の中へDEAE-dextran法にてトランスフェクションしたところ,GREを含むコンストラクトをデキサメサゾンで刺激すると,ルシフェラーゼ活性の上昇が認められた.以上の結果より,BSPプロ-モーター中のGREを介してグルココルチコイドによる転写の調節が行われていると考えられた.6,TGF-βの効果に関しては現在検討中であるが,ROS17/2.8cellsにおいてBSPmRNAの発現を上昇させることが判明している.

1, bud bone cell culture system に ス テ ロ イ ド ホ ル モ ン (グ ル コ コ ル チ コ イ ド ま た は ビ タ ミ ン D_3) を after adding to extract RNA を し, ノ ー ザ ン ブ ロ ッ ト を line っ た results, グ ル コ コ ル チ コ イ ド (デ キ サ メ サ ゾ ン) は bone シ ア ロ タ ン パ ク mass (BSP) の planning write を promote し, inverse に ビ タ ミ ン D_3 は suppression System す る こ と が.at し た. 2, グ ル コ コ ル チ コ イ ド の unseen fruit が mRNA の stability に masato and す る か ど う か を, RNA synthesis resistance against tonic を い て beg し 検 た と こ ろ, グ ル コ コ ル チ コ イ ド は stability に は influence し な い こ と が Ming ら か に な っ た. 3, BSP の cDNA を with い て, BSP 伝 son on river basin (プ ロ モ ー タ ー) の ク ロ ー ニ ン グ を い, about 3000 bp の salt base line with column の decided を っ た と こ ろ, TATA ボ ッ ク ス お よ び CAT ボ ッ ク ス の salt base with column が inverse direction で あ る こ と, ビ タ ミ ン D_3 レ セ プ タ ー combining site (VDRE) が TATA ボ ッ ク ス と repeat し て い る こ と, planning to write About 1000 bp upstream の に グ ル コ コ ル チ コ イ ド レ セ プ タ ー combining site (GRE) が す る こ と が.at し た. 4, BSP プ ロ モ ー タ ー の in GRE を ア イ ソ ト ー プ で し logo ゲ ル シ フ ト ア ッ セ イ に て グ ル コ コ ル チ コ イ ド レ セ プ タ ー と の associativity の 検 cable line を っ た results, struck が combination し, そ の combining が コ ン セ ン サ ス GRE go と co-opetition す る こ と が Ming ら か に な っ た. 5, ル シ フ ェ ラ ー ゼ ベ ク タ ー に, kind of 々 の long さ に adjust し た プ ロ モ ー タ ー posthumous son 伝 を scions into し, others in bone bud cells (cells) 2.8 / ROSI7 の へ in DEAE - method of dextran に て ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン し た と こ ろ, GRE を containing む コ ン ス ト ラ ク ト を デ キ サ メ サ ゾ ン で stimulus す る と, ル シ フ ェ ラ ー ゼ active の rise が recognize め ら れ た. の above results よ り, BSP プ ロ - モ ー タ ー の GRE を interface in し て グ ル コ コ ル チ コ イ ド に よ る line planning write の adjust が わ れ て い る と exam え ら れ た. 6, TGF - beta の unseen fruit に masato し て は now 検 please で あ る が, ROS17/2.8 cells に お い て BSPmRNA の 発 now rising を さ せ る こ と が Determine that the name is て て る.

项目成果

Yorimasa Ogata: "Glucocorticoid regulation of bone sialoprotein(BSP) gene expression" European Journal of Biochemistry. 230. 183-192 (1995)

Yorimasa Ogata：“糖皮质激素对骨唾液蛋白（BSP）基因表达的调节”欧洲生物化学杂志。