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アスピリン非感受性プロスタグランジン合成酵素の遺伝子導入による基質プールの評価

通过阿司匹林不敏感的前列腺素合酶的基因导入来评估底物库

基本信息

批准号：
07772197
负责人：
堀隆光
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Setsunan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

プロスタグランジンは、生殖・炎症・血管系など様々な場面において、多様な生理作用を持っていることが知られている。プロスタグランジン生合成系における中心的な酵素はプロスタグランジンH合成酵素(PGHS)であり、PGHSはアスピリンや非ステロイド系抗炎症剤のターゲットとしても知られている。真核細胞においては、2種のPGHSのアイソザイム、PGHS-1とPGHS-2が存在する。両酵素の一次構造のホモロジーは60%で、VmaxとKmは両酵素ではほぼ同じ値を示す。両酵素間の最も大きな相違は発現制御の違いであるが、この二つの酵素の生理機能の相違はいまだ明確ではない。本研究は、両酵素が利用しうる基質プールに着目して両者の生体における寄与を明らかすることを目的とした。実験の第一過程として、アスピリン非感受性のPGHS-1とPGHS-2の遺伝子を安定的に含有し、しかもこれらのPGHSの発現を任意にオン/オフできる細胞を構築することを試みた。本研究で用いたベクターは、GossenとBujardによって樹立されたプラミスド系である。これは、テトラサイクリンオペロンに基づいた発現誘導システムで、2段階に発現が制御される。まず、ハイブリッド転写因子tet/vp16を含むpUHD15-1をハイグロマイシン耐性プラミスドpY3と共にNIH3T3細胞にトランスフェクションし、活性化因子tTAを構成的に産生する細胞を2株単離できた。次に、これらの細胞にアスピリン非感受性に修飾したPGHS遺伝子、PGHS-1-S532AとPGHS-2-S516Aのいずれかとネオマイシン耐性プラスミドpSV2Neoをコトランスフェクションし、培地からのテトラサイクリン除去により、PGHS-1-S532AとPGHS-2-S516Aの発現を誘導できる細胞クローンを探索した。しかし、第一のトランスフェクションで単離された2つの株のどちらに第二のトランスフェクションを行っても、目的タンパクの発現を誘導できる細胞株は得られなかった。原因は不明であるがプラスミドと細胞の組み合わせに問題がある可能性があり、次回は、親株となる細胞株NIH3T3を変更して同様の実験を行う予定である。これらの細胞が得られた後、さらに実験を進めたい。

The blood vessels of reproductive inflammation, reproductive inflammation, and multiple physiological functions are known to have a lot of physiological effects. The enzyme in the center of the synthetic system, PGHS, PGHS, anti-inflammatory, anti-inflammatory and anti-inflammatory. Eukaryotic cells are characterized by the presence of PGHS, PGHS-1 and PGHS-2 genes. The enzyme is produced at one time, and the enzyme is the same as that of the Vmax Km. The maximum amount of enzyme in the enzyme is used to determine the physiological mechanism of the enzyme in the enzyme system. In this study, enzymes were sent to people who were interested in the purpose of the study. In the first step of the procedure, non-receptive PGHS-1, PGHS-2, diazepam and diazepam have been detected in the first procedure. The purpose of this study is to use the following methods: Gosseness Bujard doctor, Gosseness Bujard doctor, and Gosseng Bujard doctor. In order to improve the performance of the system, the system is designed to control the operation of the system. The writing factor tet/vp16 contains two isolates, which are composed of pUHD15-1 cells, tTA cells, NIH3T3 cells and activating factors. The second, the second, the third, the second, the second, The first, the second, the first, the second, the second, the second. If the cause is unknown, please do not know what to do. If you do not know the reason, you will be able to solve the problem. If you do not know the reason, you may have a problem. If you do not know the reason, you will not be able to do the same thing. If you do not know the reason, you will be able to do the same thing. If you do not know the reason, you will be able to do the same thing. After the cell has been rewarded, the cell will continue to be reunited.