权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

フレームシフト・モニター遺伝子導入による細胞内遊離ポリアミン変動の測定

通过移码监测基因引入测量细胞内游离多胺波动

基本信息

批准号：
07780546
负责人：
松藤千弥
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Jikei University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

オルニチン脱炭酸酵素アンチザイム(アンチザイム)は、ポリアミンにより誘導され、細胞内ポリアミンのフィードバック調節にあずかる蛋白質である。われわれはポリアミン依存性の+1翻訳フレームシフトがアンチザイムの発現とその調節に必要であることを、試験管内翻訳系において明らかにしてきた。本研究では、アンチザイムのフレームシフト効率の計測が可能な哺乳動物細胞発現系を構築し、本フレームシフトが細胞内有効ポリアミンレベルのインディケーターとなりうることを示した。さらにポリアミン依存性はアンチザイムのフレームシフトに特異的であり、レトロウイルスのフレームシフトには認められないことを明らかにした。新たに構築した細胞内発現ベクターは、指示遺伝子として5′側のβ-ガラクトシダーゼおよび3′側のルシフェラーゼを有し、両指示遺伝子間のクローニング部位にフレームシフト信号を含むcDNA断片を挿入することにより、翻訳フレームシフトに応じたルシフェラーゼの発現が得られる。実際には、細胞抽出液のβ-ガラクトシダーゼ活性/ルシフェラーゼ活性比測定によってフレームシフト効率が求められる。アンチザイムのフレームシフト信号を挿入したベクターをCos7細胞で一過性に発現させた実験では、培養液へのポリアミン(プトレッシン・スペルミジンおよびスペルミン)添加はフレームシフト効率を増加させ、最大フレームシフト効率は約30%に達した。一方、細胞内ポリアミン濃度を減少させるジフルオロメチルオルニチン処理によりフレームシフト効率は低下した。これらの薬剤の効果はhuman immunodeficiency virusのgag-pol融合蛋白質発現に関わる-1フレームシフト信号を挿入したベクターでは見られなかった。このフレームシフト検出系はCos細胞のほかNIH-3T3およびHeLa細胞でも作動することを確認した。

A protein that is regulated by the regulation of decarboxylase activity in cells, induced by intracellular decarboxylase activity. In order to adjust the occurrence of the disease, we should try to adjust the internal disease system. In this study, it is possible to measure the efficiency of mammalian cell development system, and the intracellular efficiency of mammalian cell development system is shown. In addition to the above, it is necessary to establish a system of communication between the two parties. The new construction of intracellular gene expression system indicates that there is a 5′-side β-protein fragment and a 3′-side β-protein fragment, and that there is a 5′-side β-protein fragment and a 3′-side β-protein fragment, indicating that there is a 5 ′-side β-protein fragment and a 3 ′-side β-protein fragment. In the meantime, the β-cell extract activity/activity ratio of the cell extract was determined. Cos7 cells were transiently detected when the signal was introduced into the culture medium, and the rate of increase in the culture medium was increased, and the maximum rate of increase in the culture medium was about 30%. In one case, the intracellular concentration was decreased, and the efficiency was decreased. The results of this study are as follows: human immunodeficiency virus gag-pol fusion protein development is related to the detection of human immunodeficiency virus gag-pol fusion protein. This clinical study confirmed that Cos cells, NIH-3T3 and HeLa cells can operate.