ODCアンチザイムの翻訳フレームシフト制御におけるmRNAの特異構造の役割

特定 mRNA 结构在控制 ODC 抗酶翻译移码中的作用

基本信息

批准号：
04272217
负责人：
松藤千弥
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Jikei University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.フレームシフト効率の直接測定:アンチザイムcDNAのオープンリーディングフレーム(PRF)を他の数種の遺伝子の下流に連結したキメラ遺伝子を作成し、網状赤血球溶血液における翻訳を調べた。これらの系ではフレームシフト産物と非シフト産物が同時に検出可能でありシフト効率の測定に有用である。ポリアミン非添加時のシフト産物の割合は溶血液標品により3-10%であり、この割合は0.4-0.6mMスペルミジン添加により5倍以上増大したが、野生型mRNA翻訳に対する至適濃度(0.8mM)のスペルミジンを添加した場合、全体の翻訳(おそらく開始)が強く抑制された。2.フレームシフトに必要なシークエンスの同定:アンチザイムmRNAのフレームシフト部位は、ORF1の終止コドンに先だつ2コドンの範囲にあることを欠失変異体を用いて明らかにした。一方PRF1終止コドンの下流約60塩基の範囲にステムループまたはシュードノット構造をとり得る領域がある。キメラmRNAを用いて当該領域の必要性を検討したところ、シュードノット構造の直後以降を欠失させたmRNAは全コード領域を含むものと同程度のシフト効率を示し、シュードノットの第2システムの3'側へミステムまでを欠失させてもやや低い効率ながらなおシフトが認められた。したがって下流ののシューノット構造はフレームシフトそのものには必要ではないと結論される。しかし同構造がポリアミンによるフレームシフトの促進に関与する可能性は残っており、検討を要する。3.比較生物学的検討:アフリカツメガエルのアンチザイムmRNAの部分塩基配列を決定した。すでに決定したラットおよびヒトアンチザイムmRNAの一次構造と比較すると、フレームシフト部位から下流の高次構造領域は高度に保存されており、その重要性が示唆された。

1。建立了嵌合基因的直接测量，其中嵌合基因在其他几个基因的下游连接了抗酶cDNA的开放式阅读框（PRF），并检查了网状细胞裂解的翻译。在这些系统中，可以同时检测到Frameshift和非移动产品，使其可用于测量转移效率。由于血液裂解的制剂，未添加多胺的比例为3-10％，并且增加了0.4-0.6 mm的超级胺，该比例增加了五次以上，但是当以最佳浓度（0.8 mm）添加精子时，野生型mRNA的mRNA转换（可能会被抑制）。 2。鉴定移封所需的序列：我们已经使用缺失突变体揭示了抗酶mRNA的移码位点在ORF1终止密码子之前在两个密码子范围内。另一方面，有一个区域可以将茎环或伪结结构在PRF1停止密码子下游约60个基础范围内采用。当使用嵌合mRNA研究该区域的必要性时，伪结结构后立即删除的mRNA显示出与包含整个编码区域的变化效率相似的变化效率，即使将伪结删除到伪结的第二个系统的3'侧，伪打结的第二个偏移也略有下降效率。因此得出的结论是，下游鞋结结构对于移架本身不是必需的。但是，该结构仍然可能参与多胺促进移码，并且有必要进行调查。 3。比较生物学检查：确定爪诺司青蛙抗卵形mRNA的部分核苷酸序列。与先前确定的大鼠和人类抗杀菌mRNA的原发性结构相比，从移状位点下游的构象区是高度保守的，这表明其重要性。