ODCアンチザイムの翻訳フレームシフト制御におけるmRNAの特異構造の役割

特定 mRNA 结构在控制 ODC 抗酶翻译移码中的作用

• 批准号: 04272217
• 负责人: 松藤 千弥
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04272217/
• 关键词: アンチザイム; オルニチン脱炭酸酵素; ポリアミン; 翻訳フレームシフト; ステムループ構造; シュードノット構造; 翻訳調節; 試験官内翻訳系

1.フレームシフト効率の直接測定:アンチザイムcDNAのオープンリーディングフレーム(PRF)を他の数種の遺伝子の下流に連結したキメラ遺伝子を作成し、網状赤血球溶血液における翻訳を調べた。これらの系ではフレームシフト産物と非シフト産物が同時に検出可能でありシフト効率の測定に有用である。ポリアミン非添加時のシフト産物の割合は溶血液標品により3-10%であり、この割合は0.4-0.6mMスペルミジン添加により5倍以上増大したが、野生型mRNA翻訳に対する至適濃度(0.8mM)のスペルミジンを添加した場合、全体の翻訳(おそらく開始)が強く抑制された。2.フレームシフトに必要なシークエンスの同定:アンチザイムmRNAのフレームシフト部位は、ORF1の終止コドンに先だつ2コドンの範囲にあることを欠失変異体を用いて明らかにした。一方PRF1終止コドンの下流約60塩基の範囲にステムループまたはシュードノット構造をとり得る領域がある。キメラmRNAを用いて当該領域の必要性を検討したところ、シュードノット構造の直後以降を欠失させたmRNAは全コード領域を含むものと同程度のシフト効率を示し、シュードノットの第2システムの3'側へミステムまでを欠失させてもやや低い効率ながらなおシフトが認められた。したがって下流ののシューノット構造はフレームシフトそのものには必要ではないと結論される。しかし同構造がポリアミンによるフレームシフトの促進に関与する可能性は残っており、検討を要する。3.比較生物学的検討:アフリカツメガエルのアンチザイムmRNAの部分塩基配列を決定した。すでに決定したラットおよびヒトアンチザイムmRNAの一次構造と比較すると、フレームシフト部位から下流の高次構造領域は高度に保存されており、その重要性が示唆された。

1. Direct measurement of PRF efficiency: PRF (PRF)をhis number of kinds of の伝子の下にConnect したキメラ伝子をmadeし, reticulocyte hemolytic におけるturn訳を Adjustmentべた. It is possible to measure the efficiency of でれらのではフレームシフトproduct and non-シフトproduct at the same time, which is possible and useful.ポリアミン Non-added のシフト product の cleavage は hemolysis standard により 3-10% であり, この合は0.4-0.6mM スペルミジン added により increased more than 5 times When large and wild-type mRNA is added to the appropriate concentration (0.8mM) of high-density RNA, the overall high-density RNA will be suppressed. 2.フレームシフトにNecessaryなシークエンスの同定：アンチザイムmRNAのフレームシフトPartは, ORF1's termination of the first だつ2コドンのfan囲にあることをowed loss of the variant body を いて明らかにした. One party PRF1 terminated the obscene about 60 塩基の法囲にステムループまたはシュードノットstructuring をとり得る区がある. The use of キメラmRNAをいて is necessary in this field. The structure of the ノット structure is straight and the を is lost and the whole コード field is included To the same degree, the efficiency of the シュードノットの 2nd システムの3' side へミステムまでを不了させてもややlowいefficiencyながらなおシフトがcognizeめられた.したがってIndecent ののシューノットConstruction はフレームシフトそのものにはNecessary ではないと Conclusion される.しかし同construct がポリアミンによるフレームシフトのpromote に关 and するpossibility は residual っており, 検问を要する. 3. Comparative biology discussion: The partial base arrangement of アフリカツメガエルのアンチザイムmRNA is determined.すでにDecisionしたラットおよびヒトアンチザイムmRNAの Primary Structure and Comparison すると, フレーThe high-order structure of the high-order structural area of the lower parts of the body is preserved, and the importance of the high-level structure is maintained.