ポリアミン制御因子アンチザイムの発がん過程への関与とその機序の解析

多胺调节抗酶参与致癌过程及其机制分析

基本信息

批准号：
12215148
负责人：
松藤千弥
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Jikei University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

発がんの過程でポリアミンとその合成律速酵素オルニチン脱炭酸酵素(ODC)の制御異常が起きることが知られている。本研究では、細胞内ポリアミンの制御因子アンチザイムの欠損が発がん過程に関与するかどうかを、主要分子種のAZ1ノックアウトマウスと、これに由来する培養細胞を用いて検討した。個体レベルでは、異なる遺伝的背景のAZ1欠損マウスを長期間(最長2年)飼育したが自然発がんの増加は認められず、7,12-dimethylbenz(a)anthracene(DMBA)とTPAの皮膚塗布による二段階発がん実験においても発がん傾向の増大を検出することはできなかった。AZ1欠損・非欠損マウスの間で、組織ODC活性は出生前には大きな差があるが成体では差がきわめて小さくなることが判明し、これが成体の発がん傾向が増大しない原因である可能性がある。次にC57BL/6に戻し交配したヘテロ接合体同士を交配し、胎生13.5日の胎仔から初代培養線維芽細胞を調製した。AZ1欠損の有無で細胞の形態、増殖速度、アポトーシス細胞の比率には有意差がなく、欠損細胞を長期間維持しても自然形質転換は認められなかった。SV40 Large T遺伝子導入時にはAZ1欠損、非欠損両細胞ともに同程度の形質転換効率を示し、それらの形態や増殖速度は遺伝子型間よりもクローン間で大きく異なっていた。生化学的には、AZ1欠損細胞のODC活性やポリアミンの増加は小さく、欠損細胞にもアンチザイム活性が検出されたことから、AZ2などAZ1以外のアンチザイム分子種が制御機能を代償しているものと考えられる。この他、AZ1とAPC、p53各遺伝子との二重変異マウスの作製を開始した。また、AZ1欠損マウスが示す部分致死性の解析を進め、欠損マウスの発生学的異常を見いだした。

众所周知，在癌变过程中发生了对多胺及其限制酶鸟氨酸脱羧酶（ODC）的异常控制。在这项研究中，我们研究了使用AZ1基因敲除小鼠（一种主要的分子种类）和源自此的培养细胞参与致癌过程的抗卵（抗杀菌）是否参与致癌过程。在个人级别上，长期（长达2年）保留了来自不同遗传背景的AZ1缺陷小鼠，但没有观察到自发性癌的增加，并且在两阶段的癌变实验中未检测到癌变的增加，用于皮肤应用7,12-二氨基甲基苯甲酸酯（A）（A）hnthraceen（a）hnthraceen（a）和dmba（dmba）。发现组织ODC活性在AZ1缺陷和非缺陷小鼠之间出生前有很大区别，但在成年人中它极小，这可能是成人癌变的原因。接下来，将杂合的杂合体交叉在一起，并在13.5天后从胎儿制备一级培养的成纤维细胞。在存在或不存在AZ1缺乏症的情况下，细胞形态，增殖率或凋亡细胞的比率没有显着差异，即使在长时间保持有缺陷的细胞时也没有观察到先天转化。当引入SV40大的T基因时，AZ1缺陷型和非缺陷细胞均显示出相似的转化效率，并且在克隆之间而不是基因型之间的形态和生长速率显着差异。从生化上，AZ1缺陷型细胞中的ODC活性和多胺的增加很小，并且在缺陷的细胞中检测到抗酶活性，因此人们认为除AZ2以外的AZ2（例如AZ2）（例如AZ2）（例如AZ2）可以补偿调节功能。此外，我们开始在AZ1和APC和p53基因之间产生双重突变小鼠。此外，对AZ1缺陷小鼠所显示的部分致死性分析，并发现缺乏小鼠的发育异常。