染色体分配に関与するMukBタンパクのモーター蛋白としての機能の研究

MukB蛋白作为运动蛋白参与染色体分离的功能研究

• 批准号: 07780576
• 负责人: 仁木 宏典
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780576/
• 关键词: MukBタンパク; ATP加水分解反応; Mg2+

本年度の研究目的であるMukB蛋白のATP加水分解活性を明らかにすることができた。放射性標識化ATPを用いこの加水分解産物であるADPを薄層クロマトグラフィーによって分離、検出しさらに検出したADPを定量することによって精製MukBタンパクのATP加水分解反応を明らかにすることができた。まず、このATP加水分解反応はMg2+依存性であることを明らかになった。すなわち、MukBタンパクのATP加水分解活性は1mMのMg2+存在下でみられるが、Mg2+のキレート剤である1mMEDTAをこの反応液へ添加することによりMukBタンパクのATP加水分解反応は阻害された。さらに、この中にMg2+を加えてキレート剤の影響を打ち消すと再びATP加水分解反応が観察され、このEDTAの阻害効果は見られられなくなった。MukBタンパクの精製はこのタンパクを過剰生産する菌株から行い、その検出の指標には電気泳動によるタンパクの分子量を用いてきた。MukBタンパクの精製過程の一つであるゲルろ過クロマトグラフィーで分離精製した分画でATP加水分解反応見てみたところ、MukBタンパクの溶出ピークと一致してATP加水分解反応のピークが観察された。このことからもMukBタンパクがATP加水分解活性を持つことが示唆された。酵素学的に測定したところMukBタンパクの最大反応速度(Vmax)とミカエリ定数(Km)はそれぞれ、8.4nmol/min/mg、0.13mMでありATP加水分解酵素としての活性は弱いものであった。この活性を増強させる因子の存在を探索するため野生株から細胞質画分と細胞膜画分を抽出しこれをさらにゲルろ過クロマトグラフィーで細かく再度分画した。これらの各分画を精製MukBタンパクに加え、MukBタンパクのATP加水分解活性を増強させる分画があるか調べた。しかしながら、細胞質画分と細胞膜画分ともにMukBタンパクのATP加水分解活性を増強させる分画を検出することができなかた。MukBタンパクはオペロンを形成しているMukE,Fタンパクと相互作用している可能性があらたに示唆されている。MukBタンパクのATP加水分解活性に対するこれらタンパクの影響を引き続き検討中である。

The purpose of this year's research is to determine the ATP hydrolysis activity of MukB protein. Radioactively labeled ATP is separated using a hydrolysis product, ADP, which is a thin-layered layer検出したADPをquantitativeすることによってRefined MukBタンパクのATP is decomposed with water and reacts with を明らかにすることができた.まず、このATP hydrolyzes and reacts with Mg2+ dependence であることを明らかになった.すなわち、MukBタンパクのATP hydrolysis activity in the presence of 1mMのMg2+でみられるが、Mg2+のキレート扤である1mMEDTA をこのanti-reaction solutionへAdd することによりMukBタンパクのATP and add water to decompose the reaction and block された.さらに、この中にMg2+を加えてキレートのeffectを打ち无すと againびATP Adding water decomposes the anti-oxidant and the inhibitory effect of EDTA. MukB タンパクのRefined はこのタンパクをpassing production する strain から行い, the index of the その検出のにはelectrophoresis によるタンパクのmolecule weight is used いてきた. MukB purification process: separation and purification: ATP hydrolysis Reverse 濜见てみたところ, MukBタンパクの DISSOLUTION ピークと unanimous してATP is decomposed with water and reacts のピークが観看された.このことからもMukBタンパクがATP plus hydrolysis activity をhold つことがshows instigation された. Measurement of enzymology したところMukB タンパクのMaximum reaction speed (Vmax) とミカエリfixed number (Km) はそれぞれ, 8.4nmol/min/mg, 0.13mM ATP plus hydrolytic enzyme and active enzyme. Exploration of the presence of active and potentiating factors, wild strain, cytoplasm drawing and cell membrane The painting is divided into two parts, and the painting is divided again. MukB タンパクに加え, MukB タンパクのATP with hydrolytic activity, を Increased strength, させる divided paint, があるか Adjusted べた. MukBタンパクのThe hydrolytic activity of ATP increases and the activity is strengthened. MukBタンパクはオペロンをformationしているMukE,Fタンパクとinteractionしているpossibilityがあらたに Show唆されている. MukB hydrolysis activity of ATP plus hydrolysis activity and the effect of これらタンパクのき続き検柧ある.