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大腸菌染色体分配に関与するMukB蛋白が認識する大腸菌染色体領域の解明

阐明参与大肠杆菌染色体分离的 MukB 蛋白识别的大肠杆菌染色体区域

基本信息

批准号：
05854076
负责人：
仁木宏典
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05854076/
关键词：
MukB蛋白 E.coli DNA結合蛋白 RNA結合蛋白 rRNA

项目摘要

MukB蛋白はDNA配列に結合するが、特異的DNA配列を認識して強く結合するか探索を行なった。合成したランダムな配列のDNAからMukB蛋白が強く結合するDNA配列を選択しPCR法によりDNAを増幅する方法を行なっているが、まだ特異的配列は見つかっていない。塩濃度などの条件を検討し現在も継続して解析を行なっている。その一方で、精製過程におけるMukB蛋白の挙動に注目しMukB蛋白のDNA結合能について解析した。MukB蛋白は牛胸線由来のDNAセルロースに容易に結合するが、一部分のMukB蛋白は結合せずに素通りする。この理由として、MukB蛋白がすでにで大腸菌由来のDNAに結合しており牛胸線由来DNAセルロースに結合しないのではないかと考えた。この分画を調べたところ、260nmに吸収極大が見られた。フェノール抽出した標品はDNase非感受性でRNaseに感受性があることからDNAではなくRNAが含まれていることが明かとなった。分離したRNAは平均長が100bp程であった。ゲルシフト法及びフィルター結合法によりMukB蛋白がこのRNAに結合することを確認した。MukB蛋白のRNA結合能はyeast tRNAを用いても観察された。精製過程の分画内に含まれていたRNAからcDNAを作成し47クローンについてその塩基配列を決めデータベースで検索したところ、その大半がリボソームRNAに由来するものであった。うちわけは11クローンが16S、30クローンが23SリボゾームRNA塩基配列が一致した。MukB蛋白のDNA、RNAに対する解離定数はそれぞれ0.19、0.23muMとほぼ同じで非特異的配列に対して結合しているものと考えられる。このことから、MukB蛋白はDNAとRNA両方に結合する蛋白であることが明かとなった。

MukB protein binds to DNA alignment and explores specific DNA alignment. When DNA sequences are synthesized and MukB protein binds strongly to DNA sequences, and PCR methods are used to amplify DNA sequences, specific sequences can be seen. The conditions for the determination of concentrations are discussed below. MukB protein DNA binding energy analysis is the focus of attention in the purification process. MukB protein binds easily to DNA molecules derived from bovine breast lines, and a portion of MukB protein binds easily to DNA molecules. The reason for this is that MukB protein binds to DNA of E. coli origin. The absorption maximum at 260nm was observed. The standard sample is DNase non-susceptible, RNase susceptible, DNA containing, RNA containing. The average length of the isolated RNA was 100bp. MukB protein binding to RNA was confirmed by the MukB protein binding assay and the MukB protein binding assay. MukB protein RNA binding can be detected by yeast tRNA. In the purification process, the RNA and cDNA were prepared, and most of them were prepared according to the sequence of RNA and cDNA. The RNA base alignment is consistent between 11 and 23. MukB protein DNA, RNA binding constant is 0.19, 0.23 muM, and non-specific binding constant is 0.19 muM. MukB protein binds to DNA and RNA.