大腸菌染色体分配に関与するMukB蛋白が認識する大腸菌染色体領域の解明

阐明参与大肠杆菌染色体分离的 MukB 蛋白识别的大肠杆菌染色体区域

• 批准号: 05854076
• 负责人: 仁木 宏典
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05854076/
• 关键词: MukB蛋白; E.coli; DNA結合蛋白; RNA結合蛋白; rRNA

MukB蛋白はDNA配列に結合するが、特異的DNA配列を認識して強く結合するか探索を行なった。合成したランダムな配列のDNAからMukB蛋白が強く結合するDNA配列を選択しPCR法によりDNAを増幅する方法を行なっているが、まだ特異的配列は見つかっていない。塩濃度などの条件を検討し現在も継続して解析を行なっている。その一方で、精製過程におけるMukB蛋白の挙動に注目しMukB蛋白のDNA結合能について解析した。MukB蛋白は牛胸線由来のDNAセルロースに容易に結合するが、一部分のMukB蛋白は結合せずに素通りする。この理由として、MukB蛋白がすでにで大腸菌由来のDNAに結合しており牛胸線由来DNAセルロースに結合しないのではないかと考えた。この分画を調べたところ、260nmに吸収極大が見られた。フェノール抽出した標品はDNase非感受性でRNaseに感受性があることからDNAではなくRNAが含まれていることが明かとなった。分離したRNAは平均長が100bp程であった。ゲルシフト法及びフィルター結合法によりMukB蛋白がこのRNAに結合することを確認した。MukB蛋白のRNA結合能はyeast tRNAを用いても観察された。精製過程の分画内に含まれていたRNAからcDNAを作成し47クローンについてその塩基配列を決めデータベースで検索したところ、その大半がリボソームRNAに由来するものであった。うちわけは11クローンが16S、30クローンが23SリボゾームRNA塩基配列が一致した。MukB蛋白のDNA、RNAに対する解離定数はそれぞれ0.19、0.23muMとほぼ同じで非特異的配列に対して結合しているものと考えられる。このことから、MukB蛋白はDNAとRNA両方に結合する蛋白であることが明かとなった。

MukB protein <s:1> DNA coordination に binding するが, specific DNA coordination を understanding <s:1> て strong く binding する て exploring を rows なった. Synthetic し た ラ ン ダ ム な match column の DNA か ら MukB protein が strong く combining す る DNA match column を sentaku し PCR method に よ り DNA を rights of す る line method を な っ て い る が, ま だ specific arrangement は see つ か っ て い な い. Salt concentration な <s:1> <s:1> <s:1> conditions を検 discuss る now 継続 継続 て て analysis を line なって る る る. Youdaoplaceholder0 そ one side で, refining process におけるMukB protein <e:1> 挙 movement に attention <s:1> MukB protein <e:1> DNA binding energy に て て て analysis た. MukB protein は brisket line origin の DNA セ ル ロ ー ス に に easily combine す る が part, の MukB protein は combining せ ず に element tong り す る. こ の reason と し て, MukB protein が す で に で coliform origin の DNA に combining し て お り brisket line origin DNA セ ル ロ ー ス に combining し な い の で は な い か と exam え た. <s:1> is divided into を tones べたと ろ ろ ろ and 260nmに with an absorption maximum が. See られた. フ ェ ノ ー ル spare し た standard product は DNase the susceptibility で RNase に susceptibility が あ る こ と か ら DNA で は な く contains RNA が ま れ て い る こ と が Ming か と な っ た. The average length of が たRNA is が100bp and the course is であった. ゲ ル シ フ ト method and び フ ィ ル タ combination with ー に よ り MukB protein が こ の RNA に combining す る こ と を confirm し た. The binding ability of MukB protein to RNA is to modify yeast RNAを, which can be observed by された て 観 観 観. Refining process の points within the painting contains に ま れ て い た RNA か ら cDNA を made し 47 ク ロ ー ン に つ い て そ の salt base with column を definitely め デ ー タ ベ ー ス で 検 cable し た と こ ろ, そ の most が リ ボ ソ ー に ム RNA origin す る も の で あ っ た. う ち わ け は 11 ク ロ ー ン が 16 s, 30 ク ロ ー ン が 23 s リ ボ ゾ ー ム RNA salt base consistent with column が し た. MukB protein の DNA, RNA に す seaborne る dissociation constant は そ れ ぞ れ 0.19, 0.23, muM と ほ ぼ with じ で column with the nonspecific に し seaborne て combining し て い る も の と exam え ら れ る. <s:1> <s:1> と ら ら, MukB protein である DNAとRNA two sides に binding する protein である とが とが Ming となった となった.