筋疾患モデルマウス骨格筋小胞体分画におけるクレアチンキナーゼ活性と筋疾患

肌肉疾病模型小鼠骨骼肌内质网部分的肌酸激酶活性与肌肉疾病

• 批准号: 07780755
• 负责人: 坪田 裕司
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Wakayama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780755/
• 关键词: 筋小胞体; クレアチンキナーゼ; 疾患モデル動物; 蛋白欠損; 筋疾患; CKM鎖; dystal myopathy

本研究では、dystahyopathy:筋緊張性dystrophy及びカルニチン欠損症型筋萎縮症の疾患モデル動物であるB6CBA/J-cro系統マウスを用いて、これまでの研究によりcroマウスで欠損する蛋白のアミノ酸配列の解析結果からこの蛋白がCKである可能性が強く示唆されているので、この点をさらに追求し、筋疾患発症機序及び、正常筋における筋小胞体結合型CKの生理学的意義について考察するために以下の実験を行ない成果を得た。材料にB6CBA/J-cro系統とICR系統マウスを用い、1.croマウスの筋小胞体分画で欠損する蛋白を同定するために、常法に従いCKM鎖特異抗体を用いて、筋小胞体ほかの分画におけるウエスタンブロッテイングを行った。その結果、コントロールにおいて欠損蛋白の位置に特異的反応が認められ、croマウスの筋小胞体分画で欠損する蛋白が筋小胞体結合CKM鎖であると考えられた。2.血中および筋組織各分画に於けるCK値の変動を明らかにするために、材料の血液、骨格筋を常法により前処理し、セルロースアセテート膜電気泳動によるアイソザイムを比較したところ、泳動像には明確な差は認められなかった。そこで、各分画のCK活性を分光光度計にて定量、比較した結果、croマウスではいずれの分画においても約1割の有意な活性低下が認められた。血清等で充分なCK活性が認められることは寿命や繁殖に問題のないcroマウスの筋疾患の程度と良く相関していた。このCK活性低下は筋小胞体分画におけるCK欠損に由来するものと考えられた。以上の結果から、筋小胞体におけるCKM鎖の欠損による筋収縮時のエネルギー代謝の問題が、croマウスの筋脱力と関連していることが推察された。

In this study, we investigated the mechanism and physiological significance of dystathypathy: hypertonic dystrophy and TCD/J-cro system in animals. The results of acid alignment analysis of TCD/J-cro protein showed that it was possible to explore the mechanism and physiological significance of TCD/J-cro system. Material B6CBA/J-cro system and ICR system are used in this study. 1. cro system is used in the analysis of muscle cells. The protein content is determined by the same method. CKM lock specific antibody is used in the analysis of muscle cells. As a result, the protein binding site of CKM is specific to the protein binding site of CKM and the protein binding site of CKM is specific to CKM. 2. The blood and muscle tissue are divided into two parts: CK value, blood and bone structure. The pretreatment method and the electrophoresis method of the blood and bone structure are compared. The activity of CK in each sample was quantified by spectrophotometry, and the results were compared. The serum level is sufficient to recognize the level of CK activity and the level of reproduction problems. This CK activity is low, and the reason for the CK deficiency is discussed. The above results show that the CKM lock is deficient, and the metabolism of the muscle is deficient.

项目成果

Owada-Makabe,K.: "Development of anearly thymocyte-lineage marking system." Japanese Journal of Physiolosy. 45. S36- (1995)

Owada-Makabe,K.：“早期胸腺细胞谱系标记系统的开发。”

Tsubota,Y.: "Analysis of deficit protein foundin sarcoplasmic reticulum of skeletal muscle of the B6CBA/J-cro mouse, a muscle disease mutant." Japanese Journal of Physiolosy. 45. S108- (1995)

Tsubota,Y.：“对 B6CBA/J-cro 小鼠（一种肌肉疾病突变体）骨骼肌肌浆网中发现的缺陷蛋白进行分析。”