エリスロポエチンの組織特異的(脳・肝臓・腎臓)遺伝子発現機構の解明

阐明促红细胞生成素的组织特异性（脑、肝、肾）基因表达机制

• 批准号: 07760085
• 负责人: 増田 誠司
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760085/
• 关键词: エリスロポエチン; 組織特異性; 遺伝子発現

エリスロポエチン(EPO)は、赤血球系前駆細胞の赤血球への分化・増殖に必須の糖タンパク質であり、胎児では肝臓、成体では肝臓で生産される。申請者は神経細胞に対してもEPOは作用することを示し、中枢神経系ではアストロサイトがEPOを生産し、ニューロンにEPO受容体を介して作用することを明らかにした。これによりEPOは脳・肝臓・腎臓において組織特異的発現をしていることが判明した。本研究はEPOの脳・肝臓・腎臓特異的に発現するために必須の領域を決定し、そこに結合する転写因子を同定することによりEPOの組織特異的発現調節機構を解明することを目的として研究を行った。EPO遺伝子の組織特異的発現に必要な転写調節領域の決定するために、様々な領域のヒトEPO構造遺伝子の上流および下流領域をルシフェラーゼ遺伝子の両端に接続した。これをEPOを生産する初代培養アストロサイト細胞、肝ガン細胞Hep3Bに導入し、トランジエントのルシフェラーゼ活性を指標として、脳・肝臓におけるEPO産生に必要な領域の決定を試みた。その結果、肝臓での発現にはEPOの上流0.2Kbおよび下流の酸素応答配列が存在すればよいことがわかった。いっぽう脳での発現は、上流3.5Kbと下流の酸素応答配列をルシフェラーゼに接続したものでは、酸素応答配列だけを接続したものに比べて転写の活性化が見られた。しかし上流8.5Kbを接続すると転写は抑制された。従ってこの領域は脳での特異的発現に関する部分ではないと推察された。この知見から脳での特異的発現には、されに上流あるいは下流の配列が必要であることが明らかとなった。脳でのEPO受容体の発現部位を明らかにするために、18日目のラットの免疫組織化学的染色を行い、海馬および大脳皮質に陽性のニューロンが存在することを明らかにした。

EPO is an essential carbohydrate for erythroid differentiation and proliferation, fetal and adult liver production. The applicant has a clear understanding of the role of EPO in the central nervous system, EPO production and EPO receptor mediation. This is the first time that a tissue specific event has occurred in the liver and kidney. The aim of this study is to clarify the regulatory mechanisms for EPO tissue-specific development. Tissue-specific development of EPO gene requires the determination of regulatory domains, including upstream and downstream domains of EPO gene. To determine the necessary fields for EPO production, the primary culture medium was used to introduce EPO into Hep3B cells and Hep3B cells. As a result, the occurrence of EPO in the upper stream of 0.2Kb and the occurrence of EPO in the lower stream of 0.2Kb exist. In the middle of the stream, the acid content of the upper stream is 3.5Kb, and the acid content of the lower stream is 3.5Kb. 8.5Kb high pressure water supply This domain is related to the special occurrence of the domain. The special appearance of this knowledge is necessary for the upper flow and the lower flow. Immunohistochemical staining of EPO receptor was performed on day 18, hippocampus and cortex.

项目成果

増田 誠司: "神経系に作用するサイトカインとそのレセプター" 化学と生物. 33. 437-446 (1995)

Seiji Masuda：“作用于神经系统的细胞因子及其受体”化学与生物学 33. 437-446 (1995)。

Emi, Morishita: "Anti-erythropoietin receptor monoclonal antibody: Epitope mapping, quantification of the soluble receptor, and detection of the solubilized transmembrane receptor and the receptor-expressing cells" Blood. (in press). (1996)

Emi，Morishita：“抗促红细胞生成素受体单克隆抗体：表位作图、可溶性受体的定量以及可溶性跨膜受体和受体表达细胞的检测”血液。

Masaya, Nagao: "Erythropoietin processing in erythropoietic system and central nervous system" Cytotechnology. 18. 83-91 (1995)

Masaya，Nagao：“促红细胞生成素在促红细胞生成系统和中枢神经系统中的处理”细胞技术。