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転写制御因子HMG1高発現細胞を用いた有用遺伝子高発現系の開発

使用高表达转录调节因子 HMG1 的细胞开发有用基因高表达的系统

基本信息

批准号：
07760098
负责人：
白川仁
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Tokyo University of Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760098/
关键词：
HMG1タンパク質クロマチン DNA結合性タンパク質転写調節因子

项目摘要

HMG1タンパク質は、高等生物の細胞核に普遍的に存在するDNA結合性タンパク質である。申請者らの研究により、培養細胞内でHMG1を一過性に発現させた場合、共導入したレポーター遺伝子の発現が数倍上昇することを見い出し、この発現上昇はレポーター遺伝子、あるいはプロモーター種に依存しないものであることを認めている。さらに、恒常的にHMG1を高発現する細胞を樹立し、この細胞にレポーター遺伝子を導入した場合、HMG1を一過性に発現させた場合と同様、その発現が数倍上昇した。以上のことから、このHMG1高発現細胞をもちいて、有用遺伝子の高発現系を構築できる可能性が考えられる。本研究では、HMG1の性質を利用して、HMG1高発現細胞内で有用遺伝子高発現系を構築し、その最適化を最終目的とした。当該年度は、HMG1による転写促進領域の同定および改変に関して研究を行なった。HMG1のC末端側に存在する30残基からなる酸性アミノ酸領域を欠失した変異体を発現するプラスミドをCOS-1細胞にレポーター遺伝子と共に導入した場合、HMG1によるレポーター遺伝子の転写促進能が失われた。また、C末端から5アミノ酸ずつ欠失させたHMG1変異体を発現させ同様に解析した。さらに、HMG2(HMG1との相同性が79%で、酸性アミノ酸の連続配列が23残基からなるタンパク質で、転写促進能を持たない)との対比から、HMG1にユニークな最C末端のDDDDE配列に注目して、この配列のDとEを置換した変異体や酸性アミノ酸領域の21-26の領域を欠失した変異体を発現させ同様に解析した。その結果、全ての変異体で、転写促進は認められなかった。これらの結果より、HMG1による転写促進には、酸性アミノ酸領域全体が必要で、その配列も重要であることが明らかとなった。

HMG1 is a DNA binding protein that exists universally in the nucleus of higher organisms. The applicant's research shows that HMG1 is transiently detected in cultured cells, and the expression of co-introduced HMG 1 increases several times. In addition, HMG1 is constantly detected in cells, and in cells, HMG1 is detected transiently in cells. The possibility of constructing a high-level gene expression system with the above HMG1 cells is examined. The purpose of this study is to optimize and construct a gene expression system for HMG1 in cells with high expression of HMG1. During the year, HMG1 was launched to promote research in the field of identity and change. HMG1 has 30 residues on the C-terminal side, and the acid domain is missing. When the gene is co-introduced into COS-1 cells, the gene promoter is missing. The C-terminal is 5 minutes long and the HMG1 is 5 minutes long. In addition, HMG2(HMG1) has 79% identity, 23 residues in the acid chain, 23 residues in the DNA chain, 23 residues in the DNA chain, and 23 residues in the DNA chain. The result, the whole change, the writing promotion, the recognition. HMG1 is the most important factor in promoting the development of the acid field.