核タンパク質HMG1による転写促進機構の外来遺伝子クロマチンレベルにおける解析
外源基因染色质水平分析核蛋白HMG1的转录促进机制
基本信息
- 批准号:09760102
- 负责人:
- 金额:$ 1.6万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
- 财政年份:1997
- 资助国家:日本
- 起止时间:1997 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
1、HMG1中の転写促進領域の同定:HMG1タンパク質の3つのドメインの中で、転写促進に必要な領域はC末端ドメインであることは既に明らかにした。そこでSV40プロモーターの下流にHMG1 cDNA、あるいはC末端ドメインに塩基置換、欠失を施したcDNAを挿入し、レポーター遺伝子と共にCOS-1細胞に導入し、転写促進領域の同定を行った。その結果、C末端の連続した30酸性アミノ酸の最もC末端の5アミノ酸のDDDDEの配列が転写促進に必須であることが明らかになった。さらに、HMG1のC末端ドメイン、HMG2のDNA結合ドメインをもつキメラタンパク質を発現させ、その転写促進能を検索したが、転写促進現象は認められなかった。このことより、酸性C末端部分が分子内の他部位と相互作用して機能していることが示唆された。2、転写促進においてHMG1、HMG2と共同的に働く因子の検索:HMG1、HMG2によるDNAあるいはクロマチンの構造変化反応において共同的に作用する因子、あるいは構造変化したDNAとHMG1、HMG2との複合体に結合し、転写反応に関与する因子の検索を試みた。培養細胞にHMG1、HMG2発現プラスミドを導入し、一定時間後、細胞核抽出液を調製し、抗HMG抗体をもちいた免疫沈降させた。ここで得られたタンパク質を二次元電気泳動法で解析した。その結果、HMG1、HMG2とそれぞれ特異的に結合して存在する複数種のタンパク質を同定できた。現在、抗HMG1,抗HMG2抗体をリガンドとしたアフィニティークロマトグラフィーによりこれら因子の精製とクローン化を進めている。
1, HMG1 in the writing of the promotion of the field of identity:HMG1 in the quality of the three parts of the text, the writing of the promotion of the necessary field C terminal of the text. HMG1 cDNA was introduced into COS-1 cells, and HMG1 cDNA was introduced into COS-1 cells, and HMG1 cDNA was introduced into COS-1 cells. As a result, the C-terminal chain of 30 acids and the C-terminal chain of 5 acids and DDDDE must be coordinated to promote the development of the enzyme. In addition, HMG1 and HMG2 DNA-binding sites were detected by DNA sequencing, and DNA promoter activity was detected. The acidic C-terminal moiety interacts with other sites within the molecule. 2. A study of the factors that promote the binding of HMG1 and HMG2 to the complex of DNA and HMG1 and HMG2. HMG-1 and HMG-2 cells were cultured for a certain period of time, and then the nuclear extract was prepared and anti-HMG antibodies were prepared. The analysis of the two-dimensional electrokinetic method As a result, HMG1 and HMG2 have different binding properties. Now, anti-HMG1, anti-HMG2 antibodies are being refined.
项目成果
期刊论文数量(5)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Sobajima J.,et al.: "Novel autoantigens of pANCA in ulcerative colitis : non-histone chromosomal proteins,HMG1 and HMG2." Clin.Exp.Immunol.107. 135-140 (1997)
Sobajima J.,et al.:“溃疡性结肠炎中 pANCA 的新型自身抗原:非组蛋白染色体蛋白,HMG1 和 HMG2。”
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Yamamoto,A.et al.: "Diffrence in affinity for DNA between HMG proteins 1 and 2 determined by surface plasmon resonance measuremetns" J.Biochem.122. 586-594 (1997)
Yamamoto,A.et al.:“通过表面等离子共振测量确定 HMG 蛋白 1 和 2 之间对 DNA 亲和力的差异”J.Biochem.122。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Shirakawa,H. et al.: "Nuclear accumulation of HMG2 protein is mediated by basic sequence interspaced with a long DNA-binding sequence, and----" Biochemistry. 36. 5992-5999 (1997)
白川,H.
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Yoshioka,K. et al.: "Two-step binding of HMG2 protein with DNA revealed by real-time binding measurements" Biochem.Biophys.Acta. (in press). (1998)
吉冈,K.
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Nakamura,Y. et al.: "HMG1/2 box B flanked by a short basic region in HMG2 protein is a major mediator of DNA structural alteration" Biochemistry. (in press). (1998)
中村,Y.
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- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
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