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DNA結合性タンパク質HMG1による転写促進機構のクロマチンレベルにおける解析

DNA结合蛋白HMG1在染色质水平上的转录促进机制分析

基本信息

批准号：
08760102
负责人：
白川仁
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Tokyo University of Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.HMG1によるクロマチン構造変化の解析:細胞内に導入したレポーター遺伝子由来のミニクロモソームを分離して、DNaseIに対する高感受性領域を検索したところ、転写促進の見られたHMG1高発現細胞由来のものにおいて高感受性領域が見い出された。現在、この部位の特定を行なっている。2.HMG1中の転写促進領域の同定:HMG1タンパク質の転写促進領域は、そのC末端領域に存在する酸性アミノ酸の連続配列にあることを明らかにしている。この配列の中で、脊椎動物のHMG1で高度に保存されているDDDDE配列に注目し、塩基置換を施したHMG1変異体を作製し、その転写促進能を比較した。その結果、DDDDQ,DDDNQ変異体では転写促進は見られたが、DDNNQ,DNNNQ,NNNNQでは転写促進は観察されなかった。このことから、HMG1の転写促進にはアスパラギン酸のクラスターが必須であることが明らかとなった。3.転写促進反応においてHMG1と共同的に働く因子の検索:HMG1による転写促進反応においては、DNAあるいはクロマチンの構造変化を伴うが、この反応においてHMG1と共同的に作用する因子の検索を次の方法により行なった。第一に酵母のTwo hybrid systemをもちいて、HMG1の転写促進に必須な酸性アミノ酸領域と相互作用する因子のスクリーニングを行なった。第二に、HMG1および抗HMG1抗体を固定したカラムを作製し、相互作用する因子の精製を行なった。両方法ともに現在、得られた因子の本体について解析中である。

1. Analysis of structural changes in HMG1: Separation of high sensitivity domains from the origin of introduced genes in cells, detection of high sensitivity domains from DNase I, and detection of high sensitivity domains from the origin of HMG1 cells. Now, this part of the specific line. 2. The identity of the writing promotion domain in HMG1: HMG1 has a qualitative writing promotion domain and a C-terminal domain. HMG1 is highly conserved in vertebrates, and HMG1 is highly conserved in DDDDE. Results, DDDDQ,DDDNQ, NNQ,NNNNQ HMG1 's writing promotion is required. 3. The identification of HMG1 and common factors: HMG1, DNA, DNA, structural transformation, and common factors. The first Two hybrid systems of yeast, HMG1, must be activated by the acid domain and the interaction factor. Second, HMG1 and anti-HMG1 antibodies are immobilized, and interaction factors are refined. The method is now available, the factor is available, and the analysis is available.