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ウシ肝細胞における急性相タンパク質の遺伝子発現調節機構の解析

牛肝细胞急性期蛋白基因表达调控机制分析

基本信息

批准号：
07760270
负责人：
森松正美
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

急性相タンパク質は、炎症性サイトカインが肝細胞を刺激することにより合成・分泌される血清タンパク質の総称であり、生体の防御・免疫機能に関与している。申請者はこれまでウシの急性相タンパク質の血中レベルの変動等について研究を進め、ラット等の実験動物やヒトでこれまで報告されてきたものとは異なるいくつかの特徴的な現象を見いだしてきた。本研究ではこれを更に発展させ,この現象の根幹となる遺伝子発現調節機構をin vitroの肝細胞培養実験系を用いて解明することを試み,いくつかの新知見を得ることができた。[1]ウシ急性相タンパク質の型別(I型とII型)の検討近年、ラットやヒト由来の材料を用いた研究結果に基づき、急性相タンパク質は作用するサイトカインの種類によりI型(インターロイキン(IL)-1と腫瘍壊死因子(TNF)が例外無くともに作用し,IL-6も効果があることがある)とII型(IL-6でのみ誘導される)に分類されるのが一般的となってきた。申請者は,これがウシの急性相タンパク質にもあてはまるか否かを明らかにするため,ウシのハプトグロビン(Hp),C-反応性タンパク質(CRP),alpha 1-酸性糖タンパク質(al-AG),alpha 2-マクログロブリン(a2-MG)のcDNAをそれぞれクローニングしてこれをプローブとし,サイトカインで刺激したウシの初代培養肝細胞におけるこれら急性相タンパク質のmRNA発現量をNorthernハイブリダイゼーション法で解析した。その結果,ラットやヒトでI型急性相タンパク質と考えられているHp,CRP,al-AGがいずれもTNFとIL-6で誘導されるがIL-1では誘導されないことを明らかにした.すなわち,これまでラットやヒトで提唱されているI型とII型の分類はウシにあてはまらないことを発見し,ウシに特有の急性相タンパク質合成調節機構が存在することが示唆された。[2]ウシ特有の上記機構解明の試み上記(1)についてHp,CRP,al-AGがラットやヒトでI型であることを考えると、ウシでもこれらが基本的にはI型類似だが、何らかの因子の欠陥によりIL-1に不応答であると予想できる。このウシ肝細胞に欠けている因子を遺伝子相補により単離することを最終目標としてそれに不可欠なウシ肝細胞株の樹立を試みた。ウシ初代培養肝細胞にSV40ウイルス由来の大型T抗原(LT)を導入して不死化することを試みた。哺乳動物細胞発現ベクターあるいはアデノウイルスに組み換えたLTを導入したところ,長期培養に耐える細胞がいくつか得られたが,残念ながらこれらでは急性相タンパク質遺伝子の発現を認めなかった。現在,不死化の方法を変更してさらにウシ肝細胞株樹立を試みている。

Acute phase hepatitis, inflammatory hepatocyte stimulation and synthesis・The secretion of blood serum is called blood, and it is related to the defense and immune function of the body. The applicant's research on the acute phase of the disease, such as the acute phase of the disease, and the blood of the patient験 animal やヒトでこれまで reports the phenomenon of されてきたものとはdifferent なるいくつかの特徴を见いだしてきた. The purpose of this study is to change the development of the phenomenon and the root cause of the phenomenon, and to find out the regulatory mechanism of the phenomenon. In vitro hepatocyte culture system is used to understand and test the new knowledge and gain new knowledge. [1] Discussion on the origin and use of raw materials in recent years of the acute phase of the disease (type I and type II)いたResearch results にbaseづき、Acute phase タンパク性は Effect するサイトカインのType によりType I (インターTNF (IL)-1 and tumor necrosis factor (TNF) have no effect except IL-6, and IL-6 has no effect.ることがある) and type II (IL-6 でのみ induced される) are classified as されるのがgeneral となってきた. Applicant's applicationめ,ウシのハプトグロビン(Hp),C-reactive タンパクPlasma(CRP),alpha 1-Acid glycogen (al-AG), alpha 2-マクログロブリン(a2-MG)のcDNAをそれぞれクローニングしてこれをプローブとし,サイトカインでstimulating したウシAnalysis of primary cultured hepatocytes using the acute-phase RNA-mRNA assay. Hp, CRP, al-AG TNF is used to induce IL-6 and IL-1 is induced.すなわち,これまでラットやヒトでTi singされているI type and II type のClassification はウシにあてはまらないことを発见し, ウシに's unique acute phase タンパク compound regulating mechanism がexistence することがshows instigation された. [2]ウシ's unique mechanism explanation and test (1)についてHp, CRP, al-AG がラットやヒトでI type であることをThe basic えると, ウシでもこれらが basic にはI type is similar to だが, and らかのfactor のowed 陥によりIL-1に不濜Answer であると yu think できる.このウシHepatocyte にowed けているfactor を缝子相 complement により単利するこOur ultimate goal is to establish a liver cell line and try it out. The large T antigen (LT) was introduced into the primary cultured hepatocytes, SV40, and the cells were transformed into immortalized cells. Mammalian cells are introduced into the LT system and are resistant to long-term culture.える Cells がいくつか got られたが, zanmian ながらこれらでは acute phase タンパクquality remains 伝子の発 appear を recognized めなかった. Now, the method of immortalization has been updated and the establishment of liver cell lines has been tested.