HIV由来のNefと結合する細胞性蛋白質の同定とそのAIDS発症における意義の解析

鉴定与 HIV 衍生 Nef 结合的细胞蛋白并分析其在艾滋病发病中的意义

基本信息

  • 批准号:
    07770112
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.58万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
  • 财政年份:
    1995
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1995 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

TryptaseTL_2の6個のアイソマ-のうち、5個のcDNAクロンを得た。そのうち27Kdのもの2個、及、32Kdのもの1個を用い、GSTフィユ-ジョン蛋白を大腸菌にて発現させグルタチオンビーズにて精製した。また2つの株のHIV-1Nef蛋白を大腸菌にて発現させた。各々のTryptaseTL_2のアイソマ-GSTフィユ-ジョン蛋白を結合させたグルタチオンビーズと、各々2つの株のHIV-1Nef蛋白を発現させた大腸菌ライセ-トと反応させ、結合させたものをSDS-PAGEにて展開し、Western Blotを行ないanti-Nef抗体で検出を試みたが、検出できず、大腸菌で作成した3個のTryptaseTL_2のアイソマ-GSTフィユ-ジョン蛋白は大腸菌で作成したHIV-1Nef蛋白と結合しないことが判明した。次に、Cos7細胞で大量発現させたTryptaseTL_2、27Kdのもの2個、及、32Kdのもの1個のライセ-トをHIV-1NefとGSTフィユ-ジョン蛋白を結合させたグルタチオンビーズと反応させ、結合させたものをSDS-PAGEにて展開し、Western Blotを行いanti-tryptase抗体で検出を試みたが、検出できなかった。由に他のTryptaseTL_2アイソマ-との、HIV-1Nef蛋白の結合が、想定される。或は、これらのアイソマ-が複合体としてHIV-1Nefと結合することが推定される。現在までに、HIV-1NefとSrc familyのHckがHckのSH3domainとNefのプロリンリピートP-x-x-Pモチーフで結合すること、HIVの増殖にプロリンリピートP-x-x-Pモチーフが、重要な機能を果たしていることが明らかになっている。このNefのプロリンリピートP-x-x-Pモチーフのプロリンをアラニンに置換すると、T cellから精製したnative TryptaseTL_2との結合も阻害されることを新たに示した。
TryptaseTL_2の6のアイソマ-のうち, 5のcDNAクロンを德た.そのうち27Kdのもの2pcs, and, 32Kdのもの1pcs,GSTフィユ-ジョンprotein を coliform bacteria にて発existing させグルタチオンビーズにて refined した.また2 strain のHIV-1Nef protein を coliform にて発appears させた. Each々のTryptaseTL_2のアイソマ-GSTフィユ-ジョンproteinをbindingさせたグルタチオンビーズと, each々2つの strainのH IV-1Nef protein を発appears in coliform bacteria ライセ-トとreflects させ, binds させたものをSDS-PAGE にて unfolds, Western Blotを行ないanti-Nef antibodyで検出みたが、検出できず、E. coliで成した3 piecesのTryptaseT L_2のアイソマ-GSTフィユ-ジョンprotein was made from Escherichia coli and the HIV-1Nef protein was combined with it and it was determined that it was combined. A large number of Cos7 cells appeared in TryptaseTL_2, 27Kd のもの2, and 32Kd のもの1 のライセ-トをHIV-1N efとGSTフィユ-ジョンproteinをbindingさせたグルタチオンビーズとanti応させ、combinationさせたものをSDS-PAGEにてdevelopmentし、Western Blotを行いanti-tryptase antibodyで検出みたが、検出できなかった. It is composed of TryptaseTL_2アイソマ-との, HIV-1Nef protein binding, and hypothesis. Or は, これらのアイソマ-が complex としてHIV-1Nefとcombination することがESTIMATE される. Now, HIV-1NefとSrc familyのHckがHckのSH3domainとNefのプロリンリピートP-x-x-Pモチーフでcombinationすること、HIV reproductive system It has important functions and functions.このNefのプロリンリピートP-x-x-Pモチーフのプロリンをアラニンに Replacementすると、T cellからRefinedしたnative TryptaseTL_2 combines and blocks the new ones.

项目成果

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