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大腸菌に発現させたヒト薬物代謝酵素のくすりの安全性評価への応用

大肠杆菌表达的人体药物代谢酶在药物安全性评价中的应用

基本信息

批准号：
07770306
负责人：
山崎浩史
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Osaka Prefectural Institute of Public Health
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

薬物代謝酵素の中でも最も重要な酵素のひとつであるチトクロームP450酵素の活性発現には、NADPH-P450還元酵素が必須であるが、ヒト肝の主要分子種であるP4503A4酵素を用いる再構成系における活性発現条件については、混合リン脂質等を必要とするなど、他の分子種とは異なることが示唆されている。そこで、ヒトに対する化学物質の安全性評価を目的として、ヒトのリコンビナントP450酵素から、P4503A4と遺伝的多型性が報告されているP4503A5を選び、種々の条件下で薬物代謝活性を調べ、大腸菌の電子伝達系の利用の可能性についても検討した。活性発現条件を調べたところ、両酵素のニフェジピン酸化、テストステロン水酸化活性及びアフラトキシン代謝的活性化反応は、チトクロームb_5と塩化マグネシウムに大きく依存したが、エリスロマイシン及びエチルモルフィン脱メチル化反応ではこれらを要求しなかった(論文1-4)。大量に入手可能な大腸菌の上清画分から電子伝達系に関与するflavodoxinとflavodoxin還元酵素を精製し、ウサギ肝由来のNADPH-P450還元酵素と置換したところ、P4503A4に電子を供給して薬物酸化活性を発現させたが、その触媒作用は十分ではなかった。P4503A4遺伝子を導入した大腸菌を直接を用いてもテストステロン水酸化活性が弱いながら認められた(論文1)。以上の結果から、ヒトP4503A4/5酵素の薬物酸化反応には、基質によってチトクロームb_5と塩化マグネシウムが必須となることが認められた。またP4503A4酵素遺伝子導入大腸菌がバイオリアクターとして利用可能であることが示唆されたが、医薬品等の薬理活性や毒性を検討するためには、精製ヒトP450酵素を用いて至適条件で活性を再構成し、関与するP450酵素の特定(論文5)により、化学物質の代謝的活性化や薬物相互作用等を整理して理解することが必要である。

The most important enzyme for metabolizing enzymes, the most important enzyme, P450 enzyme The main molecule of active development enzyme, NADPH-P450 reducing enzyme and essential molecule of NADPH-P450 reducing enzyme The kind of P4503A4 enzyme is used to reconstruct the system and the active condition is については, It is necessary to mix リン lipids and other とするなど, other molecular species and other とはisoなることが时憆されている.そこで、ヒトに対するSafety evaluation of chemical substances Polymorphism of RinoP450 enzyme and P4503A4 enzyme Report on the selection of P4503A5, the adjustment of metabolic activity of substances under species conditions, and the possibility of utilization of coliform electronics. Conditions for the activation of activity: Tune-up, enzyme acidification, and enzyme acidification. Acidification activity of water and activation of metabolism of びアフフラトキシン reaction 応は, チトクロームb_ 5と婩化マグネシウムに大きくdepends on したが, エリスロマイシン and びエチルモルフィン出メチル化濜ではこれらをRequirementしなかった(paper 1-4). It is possible to purchase large quantities of coliform bacteria and the supernatant of the coliform is divided into electronics and the system is connected with the flavodoxin and flavodoxin reducing enzymes and refined and ウサギ liver origin のN ADPH-P450 reducing enzyme has the function of substitution, P4503A4 has the function of electron supply, acidification activity and catalytic activity. P4503A4 was introduced into coliform bacteria and was directly used to test the water acidification activity of the coliform bacteria (paper 1). The results of the above are the results of the acidification and reaction of the enzyme P4503A4/5 enzyme and the substrate.ってチトクロームb_5と塩化マグネシウムが must be recognized by められた. It is possible to use the P4503A4 enzyme residue introduced into coliform bacteria. The physical activity and toxicity of medicinal products such as とがうされたが, medical products, etc. するためには, refined ヒトP450 It is necessary to understand the reconstruction of enzymes by adjusting their activity to optimal conditions, the specificity of P450 enzymes (paper 5), the activation of metabolism of chemical substances, and the interaction of substances, etc. It is necessary to understand.