腎疾患における中間径フィラメントの発現とそのリン酸化に関する研究

肾脏疾病中中间丝表达及其磷酸化研究

• 批准号: 07770892
• 负责人: 叶澤 孝一
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Saitama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770892/
• 关键词: vimentin; cdc2 kinase; C kinase; Ca^<2+> -calmodulin depenent kinase II; リン酸化; mesangium細胞; 糸球体内皮細胞; 糸球体上皮細胞

1.Vimentinのhead domeinのcdc2 kinase, C kinaseおよびCa^<2+> -calmodulin depenent protein kinase II (CaMK II)にそれぞれ特異的なリン酸化部位を含む合成peptideを、それぞれのkinaseでリン酸化し、peptideのC末端に導入したcystein残基を介してKLHに結合させたものをマウスに免疫して、monoclonal抗体を作製した。2.作製した抗体の特異性をELISAで検定すると、これらの抗体はマウスおよびヒトのリン酸化peptideとのみ反応し、脱リン酸化peptideとは反応しなかった。3.FCS刺激下の培養ラットmesangium細胞、ウシ糸球体内皮細胞、ラット糸球体上皮細胞を、各抗体を用いて蛍光抗体間接法で染色し、共焦点レーザー顕微鏡で観察した。ラットmesangium細胞において(1)cdc2 kinaseを介したリン酸化状態を認識する抗体は細胞分裂前、中、後期に強い反応がみられ、間期の反応は認めなかった。(2)C kinaseのリン酸化部位抗体は間期に比し細胞分裂期に強い反応を認めたが、各期に有意差はなかった。(3)CaMK IIのリン酸化部位抗体は細胞分裂の終、後期に強い反応がみられた。他の細胞もほぼ同様だが、ラット糸球体上皮細胞ではCaMK IIのリン酸化部位特異抗体は、一部の間期に最も強い反応が認められた。ラットにpuromycin aminonucleoside腎症と片腎摘後の抗Thy1.1腎炎を作成し、上記抗体を用いた蛍光抗体法で経時的に腎組織のリン酸化状態を観察した。両モデルにおいて糸球体上皮と血管平滑筋層に、cdc2 kinaseのリン酸化部位抗体との反応性を認めた。反応は早期病変で強く、時間と共に低下した。CaMKIIリン酸化部位抗体との反応性は、病初期から後期まで持続して認められた。以上よりこれらの抗体を用いて腎構成細胞の動態を観察し得、今後は各kinaseによるvimentinのリン酸化と腎病変への係わりを検討する予定である。

1. The cdc2 kinase, C kinase and Ca^<2+> -calmodulin dependant protein kinase II (CaMK II) of Vimentin's head domein contain a specific protease site, a protease site, a cystein residue introduced into the C-terminal of the peptide site, and KLH binding sites. 2. The specificity of the antibody was determined by ELISA. 3. FCS stimulated mesangium cells, endothelial cells and epithelial cells were observed by indirect staining and confocal microscopy. In mesangium cells, cdc2 kinase is involved in the recognition of the acidification state. Antibody is involved in the early, middle and late stages of cell division. (2)C Kinase activity is higher than that in cell division. (3) Antibodies against CaMK II's acidic sites are strongly anti-inflammatory at the end and anaphase of cell division. The cells of these cells are divided into two groups, and the spherical epithelial cells are divided into two groups. The specific antibodies against CaMK II are the strongest in some of the cells. Anti-Thy1. 1 Nephritis was established after kidney transplantation, and the acidification status of kidney tissue was observed by using light antibody method. In addition, the antibody against CDC2 kinase and its anti-inflammatory properties are recognized in the smooth muscle layer of the spherical epithelium. Early illness is strong, and time is low. CaMKII acidification site antibody and anti-inflammatory response, early disease, late disease, and continue to recognize. These antibodies are used to detect the dynamics of kidney constituent cells, and to determine the future dynamics of various kinases, vimentin, and kidney disease systems.