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モルヒネ活性代謝物生成に関わるヒト肝グルクロン酸転移酵素のクローニングと発現

参与吗啡活性代谢物产生的人肝葡萄糖醛酸基转移酶的克隆和表达

基本信息

批准号：
07771247
负责人：
石井祐次
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

麻薬性鎮痛薬モルヒネの活性代謝物の生成に関与する、ヒトのUDP-グルクロン酸転移酵素(UGT)について研究を行った。モルヒネの活性代謝物、モルヒネ-6-グルクロニド(M-6-G)の生成能には著しい種差がある。本研究では、モルモットとヒトがいずれもM-6-G生成能が高いことに着目した。モルモット肝には、M-6-G生成に関わっていると思われるUGT55Kが存在することから、ヒト肝にもM-6-G生成酵素がcounterpartとして存在するとの作業仮説を立てた。当教室では既にUGT55KのcDNAクローニングを行っていることから、これをプロープとして、ヒト肝のM-6-G生成UGTのcDNAクローニングを試みた。UGTは、isoform間で相同性が高いことから、多くのisoformのなかからM-6-G生成UGTのクローンを選択的に得るために、cDNAの配列のうち基質特異性の決定に重要と考えられる領域を選定し、この部分492dpをPCR増幅してプローブとした。プローブは、PCRによってフルオレセインラベルし、ヒト肝λgtllcDNAライブラリー(CLONTECH社)をスクリーニングした。3次スクリーニングまで行い、7個のポジティブクローンを得た。これらのクローンのインサートの長さは、それぞれ1.8kdp、1.5kbp(2個)、1.4kbp、1.3kbpおよび1.2kbpであった。現在、pUC119ベクターにサブクローニングを行ったところであり、制限酵素地図を作製し、DNAシークエンシングを行う段階まで進んでいる。全塩基配列を決定して、培養細胞で発現させるには至らなかった。UGTは、約530アミノ酸からなることから、その全長をエンコードするcDNAは、1.5kbp以上であると思われる。本研究で得られたクローンの中にも、全長のUGTをエンコードするものが含まれている可能性がある。

The active substitutes of parathyroid parenteral plexus were used to study the production of acid transferase (UGT). The generation energy of the active substitute, the active substitute and the active substitute. The purpose of this study is to improve the production energy of Mmur6m G in this study. There are some problems in the production of UGT55K, such as the production of the enzyme counterpart, which is responsible for the production of the enzyme, which is responsible for the production of the enzyme, which is responsible for the production of the enzyme in the production of the enzyme. When the classroom UGT55K