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モルヒネ活性代謝物生成に関わるグルクロン酸転移酵素の臓器分布について

关于参与吗啡活性代谢物产生的葡萄糖醛酸基转移酶的器官分布

基本信息

批准号：
08771203
负责人：
石井祐次
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

当教室でクローニングしているモルヒネの活性代謝物生成に関するモルモット肝UGT55KのcDNAにおいて基質特異性の決定に重要な領域を、二価金属に特異的に結合するpoly-Histidineとのfusion proteinとして大腸菌に発現させるため、読み枠を合わせてpTrcHis vectorにサブクローニングした。このようにして構築した組換えプラスミド(pGUGT-M6N)でE.coli Yop10を形質転換させた。これを、大量培養して可溶化し、fusion proteinをNi^<2+>を固定化させたアフィニティーカラムを用いて精製した。精製fusion proteinを、フロイト完全アジュバンドとのemulsionとしてウサギに感作し、数回の追加免疫の後、採血し抗血清を調製した。この抗体は、部分精製のHartley系雄性モルモットのUGT55Kを認識したが、その特異性は必ずしも高くはなかった。これは抗原とした組換えペプチドが変性状態のものであったためであると思われる。Immunoblottingによる解析については更なる検討を行っているところである。また、肝臓と脳のmRNAを調製し、このUGT55Kは特異的なRT-PCRを行ったところ、肝臓だけでなく脳においても特異的な産物が得られ、その塩基配列から、脳内にUGT55Kの存在が示唆された。このことは、脳におけるM6Gの生成の可能性と脳機能へのUGTの関与を考える上で非常に興味深いものである。

When the active substitutes are generated in the classroom, the key areas of UGT55K cDNA activity are determined by the combination of poly-Histidine, fusion protein, bacteria, bacteria, pTrcHis vector, and so on. Please tell me that you need to make sure that you have a bad situation (pGUGT-M6N), and that you have an E.coli Yop10 profile. Immobilization, mass culture, solubility, fusion protein, Ni ^ & lt;2+> immobilization, immobilization and immobilization. After several times of "supplementary immunity", blood antiserum was detected after fusion protein and antiserum tests were completed. After several times of "supplementary immunity", blood antisera were detected. Antibody, Hartley male, UGT55K, sex, sex and sex. The antigen was used in the tissue and the sex status was detected in the tissue. Immunoblotting parses the data to make sure that the line is broken. The RT-PCR of the mRNA, the liver, the liver, the UGT55K, the UGT55K. The possibility that the M6G can be generated is very interesting on the UGT and exams.