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環境ホルモンコプラナーPCBによる細胞質チロシンホスファターゼの抑制メカニズム

内分泌干扰物共面PCB对细胞质酪氨酸磷酸酶的抑制机制

基本信息

批准号：
11770183
负责人：
石井祐次
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770183/
关键词：
polychlorinated biphenyl dioxin carbonic anhydrase suppression phosphatase gene regulation liver apoptosis Carbonic anhydrase cDNA cloning muscle

项目摘要

環境ホルモンコプラナーPCBによる細胞質チロシンフォスファターゼ、肝臓型カルボニックアンヒドラーゼIII(CAIII)の抑制メカニズムを明らかにすることを目的として、まずCAIIIを高発現しておりラット肝臓由来の細胞を見出した。ラットH4IIE細胞はCAIIIの発現は高くなく、CAIIIの構成的な発現に必要な転写調節が行われていないと思われた。そこで、ラットより初代培養肝細胞を調製し、CAIIIの発現を調べると共に、3,3',4,4',5-pentachlorobiphenyl(PCB126)処理の影響も調べた。初代培養肝細胞におけるCAIIIの発現レベルは、in vivoに比べて低いものであったが、PCB126にレスポンスした発現抑制が認められた。このことから、初代培養肝細胞系が、PCB126によるCAIIIの発現抑制の研究に利用可能であると考えられた。次に、CAIIIの遺伝子発現調節領域をクローン化した。ヒトとマウスのCAIIIプロモーターの配列には、保存された領域があることから、ラットにおいても保存されている可能性があった。ラット肝臓からゲノムDNAを調製し、この配列を基にラットCAIIIプロモーターをPCR増幅した。PCR産物はダイレクトシーケンスによって配列を決定し、また、TA-cloningによって、subcloningを行った。得られたCAIII遺伝子の5'-上流域1.5kbの塩基配列を、モチーフ解析したところ、肝特異的に発現する遺伝子によく見られるCCAAT enhancer binding protein(C/EBP)結合エレメントと、xenobiotic responsive element(XRE)と呼ばれるAh-レセプター(AhR)に対する応答配列が独立して存在していた。

The cellular origin of PCB, cytosol, liver type cells, and CAIII inhibition cells were identified. H4IIE cells are required to regulate the development of CAIII and CAIII components Effects of 3,3',4,4',5-pentachlorobiphenyl(PCB126) treatment on the modulation and development of CAIII in primary cultured hepatocytes. The development of CAIII in primary cultured hepatocytes was inhibited by PCB126 in vivo. The study of inhibition of CAIII development in primary cultured liver cell line PCB126 The regulatory domain of CAIII gene development is now under review. The CAIII is the most important part of the system. The DNA sequence of the DNA sequence was amplified by PCR. PCR products can be used to determine the sequence, TA-cloning, and subcloning. CCAAT enhancer binding protein(C/EBP), xenobiotic responsive element(XRE) and AhR (AhR) were isolated from the 5'-upstream region of the CAIII protein.