正常ヒト角化細胞におけるSCC抗原の発現に及ぼすカルシウムの影響の検討

检查钙对正常人角质形成细胞中SCC抗原表达的影响

• 批准号: 07771382
• 负责人: 津永 長門
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771382/
• 关键词: 角化細胞; SCC抗原; カルシウム; PKC; リン酸化

今回我々は正常ヒト角化細胞におけるSCC抗原の発現に及ぼすCa^<2+>の影響およびPKCの関与について検討した.【方法】(1)正常ヒト角化細胞をマルチチャンバーに散布し、前培養後、各Ca濃度(0.15mM、0.5mMおよび1.0mM)に調整した培養液に交換し、培養3日目および5日目に、培養上清中および細胞内のSCC抗原濃度を測定した。測定にはSCC抗原に対するモノクローナル抗体を用いた全自動酵素抗体法を用いたIMxを使用した。(2)正常ヒト角化細胞を各Ca^<2+>濃度(0.15,0.5,1.0,および2.0mM)に調整した培養液で培養し,培養5日目にPhorbol-12-myristate-13-acetate(PMA)0,100nmolを含む培養液に交換し,経時的にAGPC法にてtotal RNAを抽出した.プローベにはSCC抗原cDNA EcoRI-PstI fragment(761bp)を用いてノーザンブロット法によって解析した.(3)大腸菌で発現させたSCC抗原(rSCC)をPKCとATP存在下で反応させin vitroでリン酸化されるか否かを2次元電気泳動法を用いて検討した。【成績】(1)Ca^<2+>はSCC抗原の細胞内産生を有意に増加させたが、培養上清中の放出量は逆に有意に増加させた。(2)SCC抗原mRNA発現はCa^<2+>濃度が上昇するに従い高くなったが、PMA添加によるSCC抗原mRNA発現の経時的変化は認めなかった.(3)rSCCはPKCによりリン酸化され酸性側にスポットが出現した。【結論】ヒト角化細胞におけるSCC抗原の細胞内産生およびmRNAの発現がCa^<2+>により亢進することが明らかとなったが,これはPKCを介した作用でなく、Ca^<2+>の直接作用によるものと考えられた.また,SCC抗原の多様性の一因としてのリン酸化にはPKCが関与していることが示唆された.

Today to my 々 は normal ヒ ト keratinocytes に お け る SCC antigen の 発 に and now ぼ す Ca ^ 2 + > < の influence お よ び PKC の masato and に つ い て beg し 検 た. [method] (1) normal ヒ ト keratinocytes を マ ル チ チ ャ ン バ ー に spread し before and after the training, the concentration of Ca (0.15 mM and 0.5 mM お よ び 1.0 mM) に adjustable The entire <s:1> た culture medium に was exchanged, cultured for 3 days および and 5 days に, and the concentration of <s:1> SCC antigen in および cells in the culture supernatant was determined by を た. Determination に は SCC antigen に す seaborne る モ ノ ク ロ ー ナ を ル antibody with い た automatic enzyme を antibody method using い た took IMx を use し た. (2) normal ヒ ト keratinocytes を each Ca ^ > < 2 + concentration (0.15, 0.5, 1.0, お よ び 2.0 mM) に adjustment し で cultivate し た broth, cultivate 5 orders に Phorbol - 12 - myristate - 13 - acetate (PMA) 0100 nmol を に exchange し containing む broth, The にてtotal RNAを was extracted by the にAGPC method over time for <s:1> た. The cDNA of the SCC antigen EcoRI-PstI was プロ <s:1> ベに ベに Fragments (761 bp) を い て ノ ー ザ ン ブ ロ ッ ト method に よ っ て parsing し た. (3) the coliform で 発 now さ せ た SCC antigen (rSCC) を PKC と で anti in the presence of ATP 応 さ せ in vitro で リ ン acidification さ れ る か no か を 気 swimming method of 2 dimensional report を with い て beg し 検 た. Ca. 【 results 】 (1) ^ 2 + > < は SCC antigen の cells produce を intentionally に raised plus さ せ た が, released in the culture supernatant の は inverse に intentionally に raised plus さ せ た. (2) the SCC antigen mRNA 発 は Ca now ^ > < 2 + concentration rising が す る に 従 い high く な っ た が, PMA add に よ る SCC antigen mRNA 発 is の 経 when variations of は recognize め な か っ た. (3) the rSCC は PKC に よ り リ ン acidification さ れ acid side に ス ポ ッ ト が appear し た. 【 conclusion 】 ヒ ト keratinocytes に お け る SCC antigen の cells produce お よ び mRNA の 発 が Ca now ^ 2 + > < に よ り hyperthyroidism す る こ と が Ming ら か と な っ た が, こ れ は PKC を interface し た role で な く, Ca ^ 2 + > < の direct action に よ る も の と exam え ら れ た. ま た, SCC antigen の multiple others の due to と し て The リ <s:1> acidification に て PKCが is related to the <s:1> て る る とが とが related to された.