動物組織リゾホスオ-リパーゼのcDNAクローニングと細胞内シグナル伝達への関与

动物组织溶血脂酶的cDNA克隆及其参与细胞内信号转导

• 批准号: 07857013
• 负责人: 杉本 博之
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07857013/
• 关键词: リゾホスホリパーゼ; トランスアシラーゼ; パルミチン酸; リゾホスファチジルコリン; ホスファチジン酸

1.ラット肝臓25Kリゾホスホリパーゼの抗体を用い,ラット肝臓λgt11cDNAライブラリーのスクリーニング行ない,本酵素のcDNAクローンを得,全アミノ酸配列を決定した。その中には,セリンエステラーゼの活性中心に特徴的なGXSXG配列を含んでいた。また,DMSO刺激によりHL60細胞が好中球に分化する際,本酵素が誘導されることがWestern blotにより確認された。しかし,mRNA量には変化がみられず,調節は転写後の段階で行なわれていると推定された。2.ラット肝臓可溶性画分からDEAEセルロース,オクチルセファロース,硫安分画,ゲル濾過,ブルーセファロース,ヒドロキシアパタイト,HPLC-DEAEを使用し,60Kのリゾホスホリパーゼ/トランスアシラーゼを精製した。この均一な標品を使用してウサギを免疫し抗体を得た。現在この抗体を用い,ラット肝臓λgt11cDNAライブラリーのスクリーニング行ない,本酵素と思われるcDNAを得たところである。

1. The enzyme cDNA library was obtained from the 25K cDNA library and the sequence of the whole enzyme was determined. In addition, the active center characteristics of GXSXG are included in the arrangement. Western blot analysis confirmed that the enzyme was induced when HL60 cells were stimulated with DMSO and differentiated into fine spheres. The mRNA level is changed and the regulation of the mRNA level is predicted. 2. DEAE solubility analysis, UV detection, sulfur analysis, UV detection,HPLC-DEAE application,60K UV detection, UV detection, UV detection. The use of uniform standard products is not immune. Now the antibody is used, and the enzyme cDNA is obtained.