クロマトグラフィーによるイムノアッセイの工学的解析

色谱免疫分析的工程分析

• 批准号: 08650948
• 负责人: 山本 修一
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08650948/
• 关键词: クロマトグラフィー; メンブレン吸着剤; 溶出曲線; 破過曲線; タンパク質分離; 物質移動; 固定相拡散; 吸着平衡

本研究は、酵素免疫測定(EIA)をFlow-Injectionすなわちカラム液体クロマトグラフィー法で迅速かつ高性能に行なうための基礎的研究を目的とし、主としてカラム内部での移動現象、すなわちタンパク質のカラム固定相への吸脱着速度(拡散係数)、混合特性、吸着平衡について定量的に解析した。また、このような方法では、1mL以下の非常に小スケールカラムが使用されるうえに、装置の自動化にともない削除不可能な付属部品があるので、extra column効果についても詳細に検討した。充填剤としては、多孔性ゲルの他に迅速な物質移動が期待できるメンブレン吸着剤も使用した。はじめにextra column効果を実験的に測定したところ、ほぼ一次応答遅れ系の関数で表現できることがあきらかとなった。また、破過曲線の形状は遅れ時間(液量)には影響されず、単純な時間あるいは液量補正だけでextra column効果のないほぼ理想的な破過曲線に一致することがわかった。一方、段階溶出についてはmodulator(塩)濃度曲線がextra column効果により広がり、またタンパク質ピークも同様に低く広がった。この溶出方法ではできるだけextra column volumeを削減する必要があることが明らかとなった。メンブレン吸着剤は物質移動速度の流速依存性が非常に低く、ある程度の流速以上ではほぼ一定の分離性能を示した。一方、多孔性充填剤カラムでは流速の影響は顕著であり、最適分離条件の推定には流速と物質移動速度の関係を定量化する必要があった。さらに、メンブレン吸着剤では、洗浄が非常に重要であり、かなり過酷なNaOHによる洗浄を定期的に行わないと吸着性能の急激な低下と圧力損失の増加が観察された。連続くり返し操作では、特にこのような洗浄特性についても注意を払う必要があることが示唆された。今後は、pseudoimmunoaffinityリガンドについての検討を行なう予定である。

The purpose of this study is to conduct basic research on Flow-Injection (EIA) for the rapid development of high performance liquid chromatography. The main purpose of this study is to analyze the internal migration phenomenon, adsorption and desorption rate (dispersion coefficient), mixing characteristics and adsorption equilibrium of the stationary phase. For example, if you are using a very small column of 1mL or less, you can automatically remove the impossible components. For example, if you are using an extra column of less than 1 mL, you can check in detail. The filling agent is porous, and other substances move rapidly. For example, if you want to know more about the relationship between the two systems, you can use the following method: The shape of the break curve is different from the time (liquid volume), which affects the time and liquid volume of the break curve. The concentration curve of one phase and one phase dissolution is the same as that of the modulator(). The dissolution method is necessary to reduce the extra column volume. The flow rate dependence of the adsorption material movement speed is very low, and the flow rate is higher than that of the adsorption material, and the separation performance is higher than that of the adsorption material. It is necessary to estimate the relationship between flow velocity and material movement velocity under optimal separation conditions. In addition, the adsorption agent is very important, and the washing is very important. The adsorption performance is rapidly reduced and the pressure loss is increased. Even if you don't want to, you have to pay attention to it. In the future, pseudoimmunoaffinity will be discussed in the future.

项目成果

Shuishi YAMAMOTO: "PREDICTING THE SEPARATION PERFORMAUCE IN ION EXCHANGE CHROMATOGRAPHY" FUNDAMENZALS OF ADSORPTION. 1027-1034 (1996)

Shuishi YAMAMOTO：“预测离子交换色谱中的分离性能”吸附的基础。

山本修一: "新タンパク質応用工学" フジテクノシステム, (1996)

Shuichi Yamamoto：“新蛋白质应用工程”Fuji Techno System，（1996）