クロマトグラフィーにおける分子認識機構と移動現象の解析による新規分離方法の開発
通过分析色谱中的分子识别机制和迁移现象开发新的分离方法
基本信息
- 批准号:11132255
- 负责人:
- 金额:$ 1.28万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
- 财政年份:1999
- 资助国家:日本
- 起止时间:1999 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
クロマトグラフィーは分子認識に基づく移動速度差分離法であるが分子認識とゾーン分散(移動速度)は独立ではない。本研究は分子認識機構と移動現象(ゾーン分散機構)を同時に解析し新規高分離性能クロマトグラフィーを開発することを目的とした。β-lactoglobulin A(LgA)とB(LgB)は同じ分子量を持ちアミノ酸組成が2箇所異なるタンパク質であり、等電点(pI)はLgAのほうが0.1程度低い。既に提案した塩濃度勾配溶出実験から吸着サイト数を決定する方法により解析したところ以下の知見を得た。LgA,LgBともにpI近傍(pH5.2)においても陰陽どちらのIECカラムにも保持された。吸着サイト数はpHがpIから離れるにしたがって増加したが、ゲルの基材やリガンドの種類にはほとんど依存しなかった。LgA,LgBは陽IECでは分離できなかったが、陰IECでは特にpI近傍で高い分離度を得ることができた。以上の結果はIECでは表面電荷分布を認識していることを示している。pI近傍では吸着サイト数は2程度であり、タンパク質が多点で保持されるというIEC分離の特徴的な条件からははずれている。既に提案した無次元数を修正することにより物質移動速度と分離効率を相関できた。Hepatitis B surface antigen(以下HBsAg)は20nm程度の直径を持つ巨大な粒子として存在することが知られている。このような巨大分子の精製方法としては種々の方法があるが、ここでは架橋度が高いセルロース粒子に硫酸基を導入した吸着剤(cellufine)を用いた。この充填剤は分子量数万以上のタンパク質は排除するが、HBsAgに対して強い親和性を持ち通常のIECより効率良く吸脱着精製が可能であった。また、IgGに対しても親和性を示し表面吸着のみであるにもかかわらず吸着速度が早いために動的吸着量は通常のゲル型IEC充填剤とほぼ同じ程度となった。ただしBSAには親和性を示さず他のIECゲルとは異なる分子認識機構があることが示唆された。
Molecular cognition is based on the difference in moving speed. Separation method is based on molecular cognition. This study aims to analyze the molecular mechanism and the phenomenon of dispersion.β-lactoglobulin A(LgA) B(LgB) The method of determining the concentration of the solution and the amount of the solution was analyzed and the following results were obtained LgA,LgB and pI near (pH5.2) are maintained. The number of sorbents depends on the type of substrate. LgA,LgB The above results show that the surface charge distribution of IEC is not stable. The number of adsorption sites in the vicinity is 2. The conditions for maintaining the characteristics of IEC separation are 2. Both the proposal and the dimensionality correction are related to the material movement speed and separation rate. Hepatitis B surface antigen(HBsAg) has a diameter of about 20nm and is known to exist as a giant particle. The method of purification of macromolecules and the method of introduction of sulfuric acid group into cellulose are used. The filling agent has a molecular weight of tens of thousands or more, and its quality is excluded. HBsAg has a strong affinity, and it has a good adsorption and desorption efficiency. The affinity of IgG and IgG shows that the adsorption rate of IgG and IgG on the surface is different. The adsorption amount of IgG and IgG on the surface is different. The affinity of BSA is different from that of other molecular recognition organizations.
项目成果
期刊论文数量(3)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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- 作者:
- 通讯作者:
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- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
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