DNA-probeクロマトグラフィー分離機構の解析

DNA探针层析分离机理分析

• 批准号: 04650858
• 负责人: 山本 修一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04650858/
• 关键词: クロマトグラフィー; DNA; DNA-プローブ; 勾配溶出

2本の一本鎖DNAが2重らせん構造になる反応は塩基配列に対して非常に特異的である。この性質を利用した固相化DNA-probeは現在臨床診断用に広く利用されているエンザイムイムノアッセイ(EIA)と同様な利用方法により遺伝子の分析技術としてEIAと相補的な役割を果たすと考えられている。さらに、固相化DNA-probeは特定遺伝子DNA/RNA断片の分取にも有用である。プローブセンサーを液体クロマトグラフィー(LC)カラム固定相に固定化したDNA-probeLCは一塩基のミスマッチの検出さえも可能な高性能分離が期待でき、分取操作としても有用である。本研究では、DNA-probeLC分離機構を特にカラム内移動現象に着目して解析した。はじめに、DNA-probeLC用高性能分離充填剤として期待されている、非多孔性粒子(粒子径2.5μm)カラムの分離特性について検討した。タンパク質(牛血清アルブミン)を試料として測定した吸着量は、回分式吸着および破過曲線の測定のどちらからも、約2mg/m^2となり理論値と近い値を示した。次に、移動相のある成分を連続的に変化させる勾配溶出法における溶出曲線の形状と操作条件や試料(溶質)の物性値との関係を数値計算実験により検討した。試料ゾーンが勾配により押し縮められる現象は、無次元化した勾配の傾き、粒子径、吸着量(分配係数)の移動相組成(Cm)依存性、溶出位置での分配係数により構成される一つの無次元変数により一つの曲線で相関された。分配係数のCmは無次元勾配と溶出位置のCmの実験結果から容易に推算できるので、流速と勾配を変えたいくつかの実験から、試料とカラム固定相の相互作用についての有用な知見を得ることができる。また、このような情報から容易に分離の最適化が可能となることが示唆された。

2. The structure of a DNA sequence is very specific. The properties of the solid phase DNA-probe are now used in clinical diagnosis. The same methods are used in the analysis of DNA. The EIA and complementary DNA probes are used in clinical diagnosis. In addition, solid-phase DNA-probes are useful for the isolation of specific DNA/RNA fragments. The separation of liquid and solid phase is expected to be useful for the immobilization of DNA-probeLC. In this study, the mechanism of DNA-probeLC separation was analyzed. High performance separation filler for DNA-probeLC and separation characteristics of non-porous particles (particle diameter 2.5μm) The adsorption amount of the sample (bovine serum) was determined, and the adsorption amount of the sample was determined. The adsorption amount of the sample was determined, and the adsorption amount of the sample was determined. The theoretical value was approximately 2mg/m2. Second, the mobile phase of the composition of the link between the change, the matching dissolution method, the shape of the dissolution curve, the operating conditions, the physical properties of the sample (solute), the relationship between the calculation of the number of values Sample size, particle size, adsorption amount (partition coefficient), mobile phase composition (Cm) dependence, dissolution position, partition coefficient, composition, dimensionless variation, curve correlation. The partition coefficient Cm is easy to calculate, the flow rate is easy to calculate, the sample is easy to calculate, the stationary phase is easy to calculate, and the stationary phase is easy to calculate. It is easy to separate and optimize the information.

项目成果

Shuichi Yamamoto Tomoyuki Suehisa Yuji Sano: "″Preparative separation of proteins by gradient‐ and stepwise‐chromatography:zone sharpening effect″" Chem.Eng.Commun.,. 119. 221-230 (1993)

Shuichi Yamamoto Tomoyuki Suehisa Yuji Sano：““通过梯度和逐步色谱法制备蛋白质分离：区域锐化效应””Chem.Eng.Commun., 119. 221-230 (1993)

Shuichi Yamamoto Yuji Sano: "Short‐cut method for predicting the productivity in affinity chromatography" J.Chromatogr.597. 173-179 (1992)

Shuichi Yamamoto Yuji Sano：“预测亲和色谱生产率的快捷方法”J.Chromatogr.597（1992）。