好中球NADPHオキシダーゼの解析と活性酸素生成機構-慢性肉芽腫症の遺伝子治療の基礎的解析-

中性粒细胞NADPH氧化酶及活性氧生成机制分析-慢性肉芽肿病基因治疗基础分析-

• 批准号: 08660356
• 负责人: 稲波 修
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08660356/
• 关键词: NADPHオキシダーゼ; 活性酸素; 慢性肉芽腫症; 組み替えDNA; p47phox; ルミノール反応; 突然変異; ウェスタンブロッティング

慢性肉芽腫症の基礎的解析を行い、その遺伝子治療の基礎的データを蓄積するために本研究は行われた。そのために、スクリプス研究所Babior博士より慢性肉芽腫症患者由来のB細胞をEBウィルスの株化した細胞の提供をうけた。本細胞はNADPHオキシダーゼコンポーネントの細胞性成分であるp47phoxが欠損していることが明らかにされている。このB細胞は正常のものと違い、ホルボールで刺激してもNADPHオキシダーゼの活性化は全く観察されなかった。また欠損しているp47phoxを過剰発現させるために発現ベクターとしてEBOpLPPにp47phoxのcDNAを組み込み、この細胞に導入したところ、活性の回復が観察され、発現されたp47phoxのC末端領域の11個のセリンがリン酸化にされていることが示された。この実験結果はp47phoxはNADPHオキシダーゼ活性化に必須のものであり、p47phoxがリン酸化されることでNADPHオキシダーゼが活性化の引き金であることが明らかにされた。以上のことからリン酸化の重要性をさらに確かめるために、303と304の位置の2個のセリン残基をアラニン残基に変異を起こさせたcDNAを発現ベクターに組み込んで発現させると活性は全く見られなくなった。さらにセリンがリン酸化させたものと類似の荷電を持つグルタミン酸やアスパラギン酸残基にこの303+304を置き換えてやると、B細胞のNADPHオキシダーゼの活性は回復することが示された。以上のことから、リン酸化が活性の獲得に必須のものであることが明らかとなった。

慢性肉芽腫症の基礎的解析を行い、その遺伝子治療の基礎的データを蓄積するために本研究は行われた。然而，巴比奥癌症研究所的Babior博士却要求慢性B白血病患者提供细胞凋亡。本细胞系NADPH介导的细胞性成分p47phox磷酸化酶抑制剂。免疫B细胞非正常增殖刺激，免疫细胞化学刺激，NADPH介导的细胞活性化全过程示波扫描。EPOp47 phox cDNA cDNA文库，细胞凋亡细胞进入噬菌体，活性回收示波器，噬菌体p47 phox C端区域11个氨基酸残基，酸性磷酸酶抑制剂，磷酸化磷酸酶抑制剂，EBOpLPP磷酸化磷酸化磷酸第47页phox抑制剂NADPH护理剂抑制剂活性化必需品申请，第47页phox抑制剂NADPH护理剂抑制剂活性化诱导金申请，第47页phox抑制剂NADPH护理剂抑制剂活性化必需品申请。以上为非特异性寡核苷酸序列，303、304位置为2个核苷酸残基的寡核苷酸序列引起的寡核苷酸cDNA序列，该序列具有特异性的寡核苷酸序列，该序列具有特异性的寡核苷酸序列，该序列的活性完全不受限制。肝细胞癌细胞凋亡抑制剂类似于荷瘤小鼠维持正常的肝细胞凋亡抑制剂303+304，B细胞凋亡抑制剂NADPH介导的肝细胞凋亡活性呈负相关。以上のことから、リン酸化が活性の獲得に必須のものであることが明らかとなった。

项目成果

Suzuki, T.: "Inhibition of collagen-induced platelet aggregation in Japanese black cattle with inherited platelet disorder, chediak-Higashi syndrome." Journal of Veterinary Medical Science. 58. 647-654 (1996)

Suzuki, T.：“在患有遗传性血小板疾病、chediak-Higashi 综合征的日本黑牛中抑制胶原蛋白诱导的血小板聚集。”

Nagahata, H.: "Functional characteristics of enhanced Fc receptor expression of β2 integrin-deficient bovine mononuclear phagocyte." Microbiology and Immunology. 40. 389-395 (1996)

Nagahata, H.：“β2 整合素缺陷的牛单核吞噬细胞 Fc 受体表达增强的功能特征。微生物学和免疫学。” 40. 389-395 (1996)

Yamashita, T.: "The effects. of α-phenyl-tert-butyl nitrone (PBN) on copper-induced rat fulminant hepatitis with jaundice." Free Radical of Biology and Medicine. 21. 755-761 (1996)

Yamashita, T.：“α-苯基叔丁基硝酮 (PBN) 对铜诱导的大鼠暴发性黄疸肝炎的影响。自由基生物学和医学 (Free Radical of Biology and Medicine) 21. 755-761 (1996)

Sato, R.: "Oral administration of bovine lactoferrin for treatment of intractablestoma-titis in feline immunodeficiency virus (FIV)-positive and FIV-negative cats." American Journal of Veterinary Research.57. 1443-1446 (1996)

Sato, R.：“口服牛乳铁蛋白可治疗猫免疫缺陷病毒 (FIV) 阳性和 FIV 阴性猫的难治性口腔炎。”

Inanami, O.: "The superoxide production from opsonized-zymosan- and PMA-stimulated polymorphonuclear leukocyte in neonatal calf." Magnetic Resonance and Medicine. 7. 117-120 (1996)

Inanami, O.：“新生牛犊中经调理的酵母聚糖和 PMA 刺激的多形核白细胞产生的超氧化物。”