アンチザイムとアンチザイムインヒビターによるポリアミン調節機構の分子進化学的解析

抗酶及抗酶抑制剂多胺调节机制的分子进化分析

• 批准号: 08670156
• 负责人: 村上 安子
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670156/
• 关键词: オルニチン脱炭酸酵素; アンチザイムインヒビター; アンチザイム; ポリアミン; 分子進化; プロテアソーム; cDNAクローニング; 染色体マッピング

哺乳動物細胞ではポリアミンの細胞内過剰蓄積は、ポリアミンによって誘導される蛋白質、アンチザイム(AZ)によるオルニチン脱炭酸酵素(ODC)分解亢進とポリアミンの取り込み抑制によって防御されている。他方、AZを阻害する蛋白質アンチザイムインヒビター(AIn)はポリアミンの迅速な供給を可能にすると推定される。本研究ではAZとAInを介する細胞内ポリアミンの調節機構の発現を分子進化学的に解析することを目的とする。成果:1.昆虫細胞におけるODC分解とその調節機構の解析:ポリアミンはODC誘導を抑制し、AZ様のODC阻害蛋白質を誘導し,既存のODCの消失を加速した。これらから昆虫細胞にもAZを介するポリアミンの調節機構が存在することが示唆された。2.魚のAZcDNAのクローニング:カエルのAZcDNAをプローブとして、ゼブラフイシュのcDNAライブラリーから、2種の異なる配列のクローンを得た。これらはいずれもカエルAZの核酸とアミノ酸の配列に約70%の相同性を示した。現在、蛋白の発現と機能を検討中である。3.AInの発現:ヒト腎臓のcDNAライブラリーからAInのcDNAをクローニングした。ラットのAInの核酸とアミノ酸の配列のいずれにも92%の高い相同性を示した。なお、ラットからは2種のcDNAが単離されていたが、未確定であった長い方の配列を確定し、両者はalternative splicingによって生じたと推定された。4.ヒトAZの染色体マッピング:ヒトAZ遺伝子をクローン化し、AZ遺伝子は第19番染色体短腕バンド13.3に局在することを明らかにした。5.酵母とラットのODC分解系の比較:酵母の26Sプロテアソーム分画はラットのODCをエネルギー依存的に分解した。しかし、AZは分解を阻害することから、酵母とラットの26SプロテアソームによるODC分解機構が異なっている可能性が示唆され、ユビキチン経路の関与も含めて今後の解析が必要である。

Mammalian cells で は ポ リ ア ミ ン の intracellular accumulation of turning は, ポ リ ア ミ ン に よ っ て induced さ れ る protein, ア ン チ ザ イ ム (AZ) に よ る オ ル ニ チ ン decarburization (ODC) acid enzyme decomposition of hyperthyroidism と ポ リ ア ミ ン の take り 込 み inhibit に よ っ て defense さ れ て い る. Fang, AZ を resistance against す る protein ア ン チ ザ イ ム イ ン ヒ ビ タ ー (AIn) は ポ リ ア ミ ン rapid の な supply を may に す る と presumption さ れ る. This study で は AZ と AIn を interface す る intracellular ポ リ ア ミ ン の regulator の 発 now を molecules into chemical analytical す に る こ と を purpose と す る. Results: 1. The insect cell に お け る ODC decomposition と そ の regulator の analytic: ポ リ ア ミ ン は ODC induced を し, AZ others の ODC induced resistance against protein を し, existing の ODC の disappear を accelerate し た. こ れ ら か ら insect cell に も AZ を interface す る ポ リ ア ミ ン の regulating mechanism exist が す る こ と が in stopping さ れ た. 2. The fish の AZcDNA の ク ロ ー ニ ン グ : カ エ ル の AZcDNA を プ ロ ー ブ と し て, ゼ ブ ラ フ イ シ ュ の cDNA ラ イ ブ ラ リ ー か ら, two の different な る match column の ク ロ ー ン を た. Youdaoplaceholder6 れら, ずれ, ずれ, ずれ, カエ, とア, AZ, <s:1> nucleic acid とア, ノ, ノ acid に, に, approximately 70% ずれ, identical を, indicating た た. Now, the protein has a と function を検 to be discussed である. 3. AIn の 発 now: ヒ ト renal viscera の cDNA ラ イ ブ ラ リ ー か ら AIn の cDNA を ク ロ ー ニ ン グ し た. Youdaoplaceholder0 <s:1> AIn <e:1> nucleic acid とア ノ ノ acid <s:1> coordination <s:1> ずれに ずれに ずれに 92% <s:1> high <s:1> homogeneity を indicates た た. な お, ラ ッ ト か ら は two の cDNA が 単 from さ れ て い た が, uncertain で あ っ た い party の with long column を determine し, struck は the alternative splicing に よ っ て raw じ た と presumption さ れ た. 4. ヒ ト AZ の chromosome マ ッ ピ ン グ : ヒ ト AZ heritage 伝 son を ク ロ ー ン し, AZ heritage 伝 は son's 19 chromosomes short arm バ ン ド に 13.3 innings in す る こ と を Ming ら か に し た. 5. Yeast と ラ ッ ト の ODC decomposition is の comparison: yeast の 26 s プ ロ テ ア ソ ー ム points draw は ラ ッ ト の ODC を エ ネ ル ギ ー dependent に decomposition し た. し か し, AZ は decomposition を resistance against す る こ と か ら, yeast と ラ ッ ト の 26 s プ ロ テ ア ソ ー ム に よ る ODC decomposition institutions が different な っ て い が る possibility in stopping さ れ, ユ ビ キ チ ン 経 road の masato and contains も め て in future の parsing が necessary で あ る.

项目成果

Y.Murakami: "Proteasome pathway is operating in intact cells." Biochem.J.317-1. 77-80 (1996)

Y.Murakami：“蛋白酶体途径在完整细胞中运行。”

K.Koguchi: "Involvement of antizyme-like regulatory protein in polyamine-caused repression of ornithine decarboxylase in insect-derived Trichoplusia ni 5 cells" Biochim.Biphys.Acta. (in press).

K.Koguchi：“在昆虫来源的粉纹夜蛾 5 细胞中，抗​​酶样调节蛋白参与多胺引起的鸟氨酸脱羧酶抑制”Biochim.Biphys.Acta。

S.Matsufuji: "Assignment of the Human Antizyme Gene (OAZ) to Chromosome 19p13.3 by Fluorescence in Situ Hybridization." Genomics. 38・1. 102-104 (1996)

S.Matsufuji：“通过荧光原位杂交将人类抗酶基因 (OAZ) 分配给染色体 19p13.3”38・1 (1996)。

Y.Murakami: "Cloning of antizyme inhibitor,a highly homologous protein to ornithine decarboxylase" J.Biol.Chem.271・7. 3340-3342 (1996)

Y.Murakami：“抗酶抑制剂的克隆，一种与鸟氨酸脱羧酶高度同源的蛋白质”J.Biol.Chem.271・7 3340-3342（1996）。