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アンチザイムの細胞増殖抑止作用の分子機構

抗酶细胞增殖抑制作用的分子机制

基本信息

批准号：
12213127
负责人：
村上安子
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Jikei University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

アンチザイム(AZ)ファミリーの機能をin vitroならびに株化細胞とAZ1(主要AZ分子種)遺伝子欠損細胞を用いて検討した。in vitroではAZ2と3はともにオルニチン脱炭酸酵素(ODC)分解を全く促進しなかった。AZ2を細胞に強制発現させると、細胞の種類と発現ベクターで程度は異なるが、AZ1に比して弱いODC分解促進、ポリアミンの取り込み抑制、ならびに細胞増殖阻害作用が認められた。他方、AZ1欠損細胞の増殖速度、ODC活性、ポリアミン濃度はいずれも非欠損細胞と差がなかった。また、AZ1欠損細胞にスペルミジンを添加するとAZ-ODC複合体の増加とともにODCが抑制された。特にポリアミンアナログであるアグマチン添加で、非欠損細胞の場合と同様に強いODC抑制(不活性なODC-AZ複合体の増加とODC分解の亢進)と増殖阻害が惹起された。以上の結果は、AZ2はAZ1と同様にポリアミンのフイードバック調節作用を有し、その過剰発現によって細胞増殖阻害がもたらされ得ることを示唆している。なお、AZ1欠損細胞で誘導されるAZは、mRNAの発現からみてAZ2と推定しているが、現在Western blottingにより確認中である。また、種々のAZ変異体を発現させて細胞増殖抑止作用に必要な最小構造の同定を試みる当初の計画に関しては、AZ断片を安定に発現する細胞を選択するためにTet-On/AZ IRES GFPの発現系を構築したがGFPの発現が弱く使用できなかった。現在発現系を改良している。予備的に、AZ断片をGFPの融合蛋白質としてトランジェントに発現させ、発現を確認した上で、ODC活性に及ぼす影響を検討したところ、対照のGFP単独発現細胞のODC活性に比較して、配列を問わず68アミノ酸残基以上のAZの断片との融合GFPを発現している細胞のODCは著しく低いという結果がみられているが、現在さらに検討中である。

The function of AZ in vitro and AZ1(major AZ species) in vitro is studied. In vitro, AZ2 and 3 are all promoted by decarbonase (ODC) decomposition. AZ2 cell stress development, cell type and development, AZ1 cell stress development, AZ1 cell stress development, cell proliferation inhibition The growth rate, ODC activity and concentration of AZ-1 deficient cells were different from those of AZ-1 deficient cells. AZ-1 is deficient in ODC. In particular, in cases where there is no loss of cells, strong ODC inhibition (increase of inactive ODC-AZ complex and increase of ODC decomposition) and proliferation inhibition are caused. The above results show that AZ2 and AZ1 have the same effect on cell proliferation. AZ gene expression in AZ1 deficient cells was detected by Western blotting. Tet-On/AZ IRES GFP development system was constructed based on the initial planning for the selection of cells for stable development of Tet-On/AZ fragments and the identification of the minimum structures necessary for the development of GFP inhibition. Now the development system is improved. A comparison of ODC activity of GFP-independent cells with respect to the detection, alignment and identification of AZ fragments and GFP fusion proteins prepared for this purpose was conducted.