アンチザイムの細胞増殖抑止作用の分子機構

抗酶细胞增殖抑制作用的分子机制

基本信息

批准号：
12213127
负责人：
村上安子
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Jikei University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

アンチザイム(AZ)ファミリーの機能をin vitroならびに株化細胞とAZ1(主要AZ分子種)遺伝子欠損細胞を用いて検討した。in vitroではAZ2と3はともにオルニチン脱炭酸酵素(ODC)分解を全く促進しなかった。AZ2を細胞に強制発現させると、細胞の種類と発現ベクターで程度は異なるが、AZ1に比して弱いODC分解促進、ポリアミンの取り込み抑制、ならびに細胞増殖阻害作用が認められた。他方、AZ1欠損細胞の増殖速度、ODC活性、ポリアミン濃度はいずれも非欠損細胞と差がなかった。また、AZ1欠損細胞にスペルミジンを添加するとAZ-ODC複合体の増加とともにODCが抑制された。特にポリアミンアナログであるアグマチン添加で、非欠損細胞の場合と同様に強いODC抑制(不活性なODC-AZ複合体の増加とODC分解の亢進)と増殖阻害が惹起された。以上の結果は、AZ2はAZ1と同様にポリアミンのフイードバック調節作用を有し、その過剰発現によって細胞増殖阻害がもたらされ得ることを示唆している。なお、AZ1欠損細胞で誘導されるAZは、mRNAの発現からみてAZ2と推定しているが、現在Western blottingにより確認中である。また、種々のAZ変異体を発現させて細胞増殖抑止作用に必要な最小構造の同定を試みる当初の計画に関しては、AZ断片を安定に発現する細胞を選択するためにTet-On/AZ IRES GFPの発現系を構築したがGFPの発現が弱く使用できなかった。現在発現系を改良している。予備的に、AZ断片をGFPの融合蛋白質としてトランジェントに発現させ、発現を確認した上で、ODC活性に及ぼす影響を検討したところ、対照のGFP単独発現細胞のODC活性に比較して、配列を問わず68アミノ酸残基以上のAZの断片との融合GFPを発現している細胞のODCは著しく低いという結果がみられているが、現在さらに検討中である。

在体外和细胞系和AZ1（主要AZ物种）基因缺陷型细胞中研究了抗酶（AZ）家族的功能。在体外，AZ2和3均未促进鸟氨酸脱羧酶（ODC）降解。当AZ2被迫在细胞中表达时，不同的细胞类型和表达载体的程度不同，但是发现它会促进ODC降解，抑制多胺摄取并抑制细胞的生长，这比AZ1弱。另一方面，AZ1缺陷型细胞的生长速率，ODC活性和多胺浓度与非缺陷细胞的细胞没有差异。此外，在AZ1缺陷型细胞中添加精子量抑制了ODC，并增加了AZ-ODC复合物的增加。特别是，添加agmatin，一种多胺类似物，引起了强烈的ODC抑制（增加了ODC-AZ复合物，ODC降解增加）和生长抑制作用，如非缺陷细胞而言。以上结果表明，与AZ2一样，AZ2具有多胺的反馈调节作用，并且其过表达可以导致细胞生长的抑制作用。此外，尽管在AZ1缺陷型细胞中诱导的AZ估计是基于mRNA表达的AZ2，但目前正在通过蛋白质印迹证实。此外，关于试图通过表达各种AZ突变体来识别细胞增殖抑制所需的最小结构的最初计划，构建了Tet-on/az IRES GFP表达系统，以选择稳定表达AZ片段的细胞，但GFP表达却很弱，并且不可能使用。表达系统目前正在改进。初步地，AZ片段以GFP融合蛋白的形式瞬时表示，并且在证实其表达后，检查了对ODC活性的影响。已经发现，表达融合GFP的细胞的ODC具有68个氨基酸残基或更多序列的AZ片段的片段明显低于单独的对照GFP的ODC活性，但目前正在进行进一步的研究。