オルニチン脱炭酸酵素アンチザイムの役割-遺伝子導入による解析-

鸟氨酸脱羧酶抗酶的作用-基因转移分析-

• 批准号: 01570143
• 负责人: 村上 安子
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01570143/
• 关键词: オルニチン脱炭酸酵素; cDNA; 分解; 遺伝子導入; ポリアミン; アンチザイム; アンチセンスRNA

アンチザイムはオルニチン脱炭酸酵素(ODC)の反応生成物ポリアミンによって誘導される蛋白質であり、ODCに特異的に結合してこれを不活性化する。われわれはアンチザイムとの結合がODCの迅速な分解の引金になる可能性を示唆してきた。本研究では下記のように遺伝子導入法によって、アンチザイムはポリアミンによるODC分解の加速に必要な蛋白質であることを直接的に証明した。(1)アンチザイム全長cDNAのクロ-ニングすでに得られていた部分長のcDNAをプロ-ブとして、新たに作製したラット肝ライブラリ-から最長1.1kbのアンチザイムcDNAをクロ-ニングした。プライマ-伸長法によりmRNAのcap部位は本cDNAの5'端の14ヌクレオチド上流であることが示され、本cDNAはほぼ完全長とみなされた。大腸菌直接発現系における本cDNA産物はアンチザイム活性を有した。(2)アンチザイムcDNAの遺伝子導入アンチザイムcDNAを、デキサメサゾンにより制御可能なMMTV-LTRプロモ-タ-をもつ発現ベクタ-に組み込み、これをCHO細胞にリン酸カルシウム法で導入した。G418選択後デキサメサゾンによってアンチザイムが誘導される安定な形質転換細胞が得られた。この細胞にODCを誘導後デキサメサゾンを添加するとODCが消失した。(3)アンチセンスDNAによる内在性アンチザイム遺伝子発現の抑制当初計画していた化学合成アンチセンスオリゴヌクレオチド(15〜20ヌクレオチド)によるアンチザイム遺伝子発現の抑制を試みたが、抑制効果が得られなかった。そこでアンチザイムcDNAを逆向きに上記発現ベクタ-に組み込み、アンチセンスアンチザイムmRNAを発現させた。この形質転換細胞においてはデキサメサゾン処理後プトレッシンによるODC分解の加速効果が消失した。

In this paper, the combination of decarbonate enzyme (ODC) and the product of decarbonate (ODC) and the combination of protein and protein were studied. Please contact ODC to quickly analyze the possibility of introducing gold to show that it is not possible. The purpose of this study is to speed up the decomposition of ODC in order to speed up the necessary proteins. (1) the total length of the cDNA is very long. If there is an increase in the total length of the cDNA, there will be a long period of time in which the cDNA will be affected, and the new one will be the most expensive. This cDNA 5 'end is 14 times higher than that of the mRNA cap, and the cDNA section is completely long. Daphnia Magnoliae is directly linked to this cDNA compound, and its activity is very high. (2) if you need to know how to use cDNA, you may need to make sure that you are aware of the possibility that you will be able to improve the performance of your cDNA. (2) if you do not know how to do this, you may need to know that you may have a problem. (2) if you do not know what to do, you may need to know that you may have a problem. (2) if you do not know how to do this, you may need to know that you may have a problem. (2) if you do not know what to do, you may need to know that you may have a problem. (2) if you do not know what to do, you may need to know that it is possible to improve your performance. (2) if you do not know what to do, you may need to make sure that you have a problem with cDNA. (2) if you have a problem, you can In the wake of G418, we need to know that the cells are safe and stable. After you ODC the phone, you add the ODC to disappear. (3) the chemical synthesis, chemical synthesis and chemical synthesis. In the reverse direction of the cDNA, you can see that you have a problem. You need to know that you are in a bad situation. You need to know that you have a problem with mRNA. The ODC decomposition accelerates the disappearance of the fruit.

项目成果

Y.Murakami: "Direct evidence that antizyme mediates the effect of polyamines on ODC turnover"

Y.Murakami：“抗酶介导多胺对 ODC 周转影响的直接证据”

S.Matsufuji: "Analysis of ornithine decarboxylase antizyme mRNA using a cDNA cloned from rat liver"

S.Matsufuji：“使用从大鼠肝脏克隆的 cDNA 分析鸟氨酸脱羧酶抗酶 mRNA”