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T細胞受容体シグナルによるJAK-STATシステムの制御機構

T细胞受体信号对JAK-STAT系统的控制机制

基本信息

批准号：
08670361
负责人：
宮武昌一郎
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

SDS及びTritonを含むRIPAバッファーを用いて調整した、TCRシグナルにより活性化したT細胞クローンの細胞抽出液の解析や、パルスチェイス法によっても、JAK3およびSTAT5の減少が見られ、これらの蛋白質の細胞内局在の変化ではなく、分解が亢進していることが、その減少の原因であることを示した。ライソゾームの機能を減弱させる塩化アンモニウム処理、システインプロテアーゼインヒビターE64、プロテアゾームインヒビターMG115、MG132およびラクタシスチンなどの処理によっては、TCR刺激によるJAK3およびSTAT5の減少を抑制することはできず、JAK3やSTAT5の分解におけるこれらのタンパク分解系の関与は今のところ認められない。TCRシグナルによる増殖抑制が、ZAP70を介するか検討するため、レトロウイルスベクターにより、T細胞クローンに、ヒトCD2の細胞外領域にヒトZAP70を融合した遺伝子を導入し、さらにFACSを用いて、高発現している細胞群を分離した。この融合遺伝子は、T細胞白血病細胞株ジャーカットにおいては、発現させるだけで活性化シグナルを誘導するが、T細胞クローンでは、抗CD2抗体によるクロスリンクによっても活性化に影響しなかった。ジャーカット細胞とT細胞クローンにおいて異なる結果になった原因は不明である。抗CD28抗体を用いたCD28を介するコスティミュレーションシグナルは、TCRシグナルによる増殖抑制に対して影響は認められなかった。我々の用いたT細胞クローンは、CTLA4を発現しない。そこでTCRシグナルに対するCTLA4の影響を解析するために、レトロウイルスベクターを用いてCTLA4を導入した。興味深いことに、CTLA4は細胞内に局在し、TCRシグナルによる活性化に伴い細胞表面に発現した。抗原と抗原提示細胞による刺激の場合には、CTLA4の発現により活性化は抑制されたことからCTLA4が抑制シグナルを導入することが示唆された。TCRシグナルとCTLA4シグナルを分離して導入できるシステムの樹立し、TCRシグナルによる増殖抑制に対するCTLA4シグナルの影響を解析する予定である。

SDS and Triton contain RIPA, TCR, activation, analysis of T cell extracts, JAK3 and STAT5, and the reduction of intracellular proteins. The function of the system is reduced, and the system is processed, and the system is processed. TCR cell proliferation inhibition, ZAP70 mediated cell culture, cell culture, T cell culture, CD2 extracellular domain, ZAP70 fusion, gene introduction, FACS application, and isolation of cell populations. The fusion gene is expressed in T cell leukemia cell lines, and the activation of T cell leukemia cells is induced by anti-CD2 antibodies. The reason for the difference is unknown. Anti-CD28 antibodies are used to inhibit the proliferation of CD28 cells. We use T cells to express CTLA4. The impact of CTLA4 on TCR is analyzed and introduced. The activity of CTLA4 is found on the cell surface. Antigen suggests that when cells are stimulated, CTLA4 activation is inhibited, and CTLA4 inhibition is introduced. TCR and CTLA4 are separated, introduced, and analyzed for the effects of TCR and CTLA4 on proliferation inhibition.