抗原によるT細胞活性化にともなう遺伝子発現の誘導制御機構
抗原诱导T细胞激活相关基因表达的诱导控制机制
基本信息
- 批准号:04833002
- 负责人:
- 金额:$ 1.28万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
- 财政年份:1992
- 资助国家:日本
- 起止时间:1992 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
1、T細胞活性化にともなうGM-CSF遺伝子の活性化に必要な領域として転写開始点より-41塩基(bp)から-49bpの領域が必要であることが示され、CLEOと命名した。2、Jurkat細胞核抽出液を用いたIn Vitro転写系においてもCLEOが転写活性に必要であることが示された。ゲルシフトアッセイにより、-42bpから-49bpの領域に結合する蛋白質(NF-CLEOa)と-46bpから-53bpの領域に結合する蛋白質(NF-CLEOb)を同定した。これらの蛋白質の完全精製には至っていない。T細胞の活性化に伴い、NF-CLEObは増大するが、NF-CLEOaの発現量は変化しない。3、T細胞で誘導される他のリンフォカインであるIL-4とIL-5や、サイトカインであるG-CSFのプロモーター領域にもCLEOと相同性を持つ配列が見いだされた。さらに転写因子Ets1およびEts2の結合配列として見いだされた、ポリオーマウイルス、MSV、T細胞受容体α鎖のエンハンサー内の配列とも相同性を持つ。これらの配列の中で、ゲルシフトアッセイにより、IL-4、IL-5およびポリオーマの配列には、NF-CLEOa及びNF-CLEObが結合することが示され、NF-CLEOa及びbがT細胞活性化の際のリンフォカインの発現誘導に共通に働く転写因子であることが示唆された。Ets familyの蛋白質の共通部分を認識する抗体はCLEOa及びCLEObのDNAに対する結合を阻害することからEts familyの蛋白質であると考えられる。ヒトEts1およびEts2をCMVプロモーターにつないだプラスミドとGM-CSFプロモーターにCATをつないだプラスミドをJurkatなどのT細胞に導入したが、残念ながらどちらの転写因子もプロモーターへの影響は見られなかった。4.T細胞ハイブリドーマ2B4にEts1遺伝子を導入しstable transformantを樹立したが、活性化に伴うリンフォカインの産生には変化が見られなかった。今後Ets familyの他の転写因子を用いて、同様の実験をする必要がある。またNF-CLEOa及びbの精製とcDNAクローニングをおこなう。
1. T cell activation is necessary for activation of GM-CSF gene. It is necessary to write the starting point of-41 bp and-49 bp. 2. In Vitro culture medium, the activity of CLEO is essential. The protein binding between the-42bp domain and the-49bp domain (NF-CLEOa) and the protein binding between the-46bp domain and the-53bp domain (NF-CLEOb) are equally determined. The protein is completely refined and refined. T cell activation, NF-CLEOb increase, NF-CLEOa production decrease 3. T cells are induced by other factors such as IL-4, IL-5, G-CSF, CLEO and identity. In addition, the binding alignment of Ets1 and Ets2 is maintained in the same way as that of the binding alignment of Ets 1 and Ets 2. Among these combinations, NF-CLEOa and NF-CLEOb bind to each other in the combinations of IL-4, IL-5, and Polio, which suggests that NF-CLEOa and NF-CLEOb are common factors in the induction of receptor activation during T cell activation. Ets family proteins are recognized by antibodies that inhibit binding to CLEOa and CLEOb DNA. Ets1 and Ets2 are used for CMV and GM-CSF. CAT and Jurkat are used for T cell induction and residual effects of CMV and GM-CSF. 4. T cells are transformed into stable transformants, activated, and produced. In the future, Ets family's other writing factors will be used in the same way. NF-CLEOa and b are refined and cDNA is extracted.
项目成果
期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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